KiSs-1/GPR54系统在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用及其机制

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JoanFang
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目的:  探讨KISS-1/GPR54系统在子宫内膜的表达、定位及其在蜕膜化中作用。  方法:  1、通过实时定量PCR、免疫组织化学等方法观察小鼠围植入期子宫内膜组织中KISS-1和GPR54的表达水平及表达部位变化。  2、运用在体人工蜕膜化模型,观察KISS-1、GPR54的表达是否受活化胚胎的影响。  3、构建去卵巢及性甾体激素处理的子宫模型,观察甾体激素对KISS-1和GPR54表达的影响。  4、通过子宫内膜基质细胞分离、培养及体外诱导分化,检测在离休状态下蜕膜化过程中KISS-1、GPR54表达水平的变化。  5、通过RNA干扰技术,观察KISS-1对小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响。  结果:  1、实时定量PCR结果显示,在妊娠D1-D5天,KISS-1、GPR54 mRNA表达量均较低。随着蜕膜化的进程(妊娠D6-D8天),与妊娠D1天相比,KiSS-1和GPR54 mRNA的表达量均显著性增加(P<0.01)。免疫组化结果显示,在小鼠妊娠D1-4天,KiSS-1和GPR54蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮细胞上,且表达水平较低,与实时定量PCR结果相一致。从妊娠D5天开始,KiSS-1和GPR54蛋白的表达量均显著性增加,主要表达于围绕胚胎的子宫蜕膜组织。  2、在在体的人工诱导蜕膜化模型中,与对照组相比,注射芝麻油一侧的子宫角随着时间的延长(假孕D5至8天)逐渐增大,而对照组子宫角没有明显变化。在人工诱导蜕膜化的子宫组织,KiSS-1、GPR54 mRNA表达水平均随着蜕膜的进展逐渐增加,至假孕第8天达到最高峰。在假孕第5天,KiSS-1、GPR54蛋白主要表达于腔上皮,且信号较弱,然而在假孕第6天,蜕膜组织中KISS-1、GPR54蛋白信号均显著性增加,并随着蜕膜化的进程逐渐增加。  3、在去卵巢的子宫组织中,KISS-1 mRNA表达水平比较低。经E2、P4或E2+P4处理后,与对照组相比(芝麻油处理组),KISS-1 mRNA表达水平均显著增加(均为P<0.01),并于注射后的3h达到高峰;P4与其拮抗剂RU486共同处理组没有明显增大(P>0.05);E2与其拮抗剂Tam共同处理组,则进一步增强E2对KISS-1 mRNA表达上调的效应(P<0.05)。  4、分离培养的小鼠子宫内膜基质细胞,免疫荧光法检测显示,基质细胞表达Vimentin而不表达Cytokeratin。在体外经E2和P4联合处理24-72h后,基质细胞表现出的形态符合蜕膜细胞的特异性形态学特征;免疫印迹法和定量PCR检测显示,蜕膜化的标记分子,包括Cyclin D3蛋白、PR蛋白以及dPRP mRNA的表达水平在体外培养48h、72h后均显著性增加。同时KISS-1和GPR54 mRNA的表达水平也随时间逐渐增加。  5、在体外培养的子宫基质细胞蜕膜化模型中,转染KISS-1 siRNA后,与对照组相比(无义序列组),在培养后24h、48h、72h,KISS-1 mRNA表达水平均显著性下降(P<0.01,0.05),说明KISS-1 siRNA能特异性抑制了KiSS-1mRNA的表达。KISS-1基因下调同时,蜕膜化的标记分子dPRP(mRNA)、Cyclin D3(蛋白)和PR(蛋白)的表达水平也均相应下调,提示KISS-1基因的下调能抑制子宫基质细胞蜕膜化进程。  结论:  在妊娠早期,KiSS-1/GPR54系统时空性的表达于母胎界面,且受E2、P4及子宫内膜蜕膜化的影响;干涉KISS-1后子宫内膜基质细胞的蜕膜化受到明显抑制,说明KiSS-1/GPR54系统具有促进子宫内膜的蜕膜化作用。
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