论文部分内容阅读
隐睾是新生儿中最常见的泌尿生殖系统异常,是男性不育的主要原因。现在已经明确睾丸温度升高就会引起生精细胞死亡和精子发生障碍,从而导致不孕,这说明相对低温是正常精子发生所必需的条件。手术诱导隐睾是一个很常用的用于研究高温对精子发生障碍影响的疾病模型,然而在手术诱导隐睾后生精细胞的死亡过程及细胞类型等方面还有很多相互矛盾地方,且高温对精子发生影响的精确分子调控机制目前尚不清楚。本实验通过形态学、体视学和流式细胞术的方法分析手术诱导隐睾后睾丸内生精细胞的死亡和消失过程,再结合TUNEL.免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot的方法探讨Hsf1、Hsf2和Tdag51对隐睾术后精母细胞凋亡的作用。本实验还通过形态学和免疫组织化学染色的方法检测CDC25A、SCF、AR和ERa在睾丸间质细胞中的表达,探讨隐睾术后睾丸间质细胞形态和功能的改变。手术诱导隐睾后睾丸重量明显下降,而附睾重量却在术后7天时明显增加,形态学观察发现附睾头部管腔内充满了大量从生精小管排出的圆形生精细胞。体视学方法研究发现变形中的精子细胞(10-13期)、新生的精子细胞(1期)以及分裂期的精母细胞对睾丸温度升高最敏感。生精细胞按照以下顺序先后消失：最先消失的是变形中的精子细胞,其次是新生的精子细胞,接着是其它精子细胞,再接下来才是精母细胞,精原细胞是最后消失的细胞类型。流式细胞术发现次单倍体细胞所占的比例在隐睾术后3天时就显著下降(从42.01%±5.74%到15.98%+3.88%),隐睾术后7天时,在四倍体峰的前面出现一个明显的凋亡峰,二倍体与四倍体之间的非整倍体细胞占到细胞总数的14.05%±2.98%,提示此时有大量精母细胞凋亡,与TUNEL法的检测结果一致。在隐睾术后3天时Tdag51的mRNA表达量就明显升高；到7天时,Hsfl和Tdag51分别大量表达于精母细胞的细胞核和细胞质内,而且此时也观察到大量精母细胞凋亡,说明Hsf1/Tdag51通路可能参与隐睾诱导的精母细胞凋亡过程。本实验还发现Hsf2也在隐睾术后7天时在精母细胞的细胞核和细胞质内都呈强阳性表达,提示Hsf2可能也参与了精母细胞的凋亡过程。手术诱导隐睾后,尽管睾丸间质的体积占整个睾丸的比例明显升高,但睾丸间质的绝对体积并没有明显改变,睾丸间质细胞的数量和光镜下形态也无明显变化。免疫组织化学染色发现CDC25A和SCF在睾丸间质细胞内呈强阳性着色,隐睾对他们的表达没有明显影响；AR在间质细胞表达较弱,位于细胞质内,隐睾对其表达也没有明显影响；ERa在对照组睾丸间质细胞内表达较弱,基本无细胞核呈阳性着色的间质细胞,但随着隐睾术后时间的延长,细胞核呈ERα阳性着色的比例明显升高,在隐睾术后28天时达到93.6%。以上结果提示大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞的数量和光镜下形态无明显影响,但对其甾体类激素合成及相关调节功能有明显影响。