第一章急性髓细胞白血病患者骨髓样本中鞘糖脂Lc3的表达目的：研究人骨髓样本中的主要种类鞘糖脂的表达谱，对比急性髓细胞白血病患者骨髓样本与正常对照骨髓样本中鞘糖脂的差异，寻找与急性髓细胞白血病相关的特征鞘糖脂，进而研究其生物学功能及在急性髓细胞白血病中的作用。方法：(1)采用有机溶剂超声波提取的方法提取急性髓细胞白血病患者骨髓样本和正常对照骨髓样本中的鞘糖脂；(2)将提取所得鞘糖脂进行甲基化修饰反应，使其具有较高的质谱响应以便更好的进行质谱分析；(3)对所得甲基化鞘糖脂进行质谱定性分析，确定各主要鞘糖脂的种类及具体结构，对比急性髓细胞白血病患者与正常对照骨髓样本中鞘糖脂的结构差异；(4)对所有骨髓样本中鞘糖脂进行相对定量质谱分析：等量混合氘代甲基化的急性髓细胞白血病患者骨髓样本鞘糖脂和正常甲基化的正常对照骨髓样本鞘糖脂，发现鞘糖脂lactosylceramide （LacCer）的含量在急性髓细胞白血病患者骨髓样本与正常对照骨髓样本中的表达水平是基本恒定的，以此为内参，进行其他种类鞘糖脂的相对定量分析，对比急性髓细胞白血病患者骨髓样本与正常对照骨髓样本中鞘糖脂表达水平的差异。结果：(1)通过多级质谱检测技术对各种鞘糖脂进行定性分析，发现在急性髓细胞白血病患者骨髓样本和正常对照骨髓样本中，都主要含有LacCer，globotrihexosylceramide（Gb3），lactotriaosylceramide（Lc3）和GM3四种鞘糖脂，而作为同分异构体的globotetraglycosylceramide（Gb4）和neolactotetraosylceramide（nLc4），前者主要存在于正常对照骨髓样本中，后者则主要存在于急性髓细胞白血病患者骨髓样本中；(2)以LacCer作为内参，通过一级质谱分析对骨髓样本中的鞘糖脂进行相对定量表征，Gb3、Lc3和GM3的丰度与LacCer的丰度的比值代表Gb3、Lc3和GM3的相对量，发现Lc3和GM3在急性髓细胞白血病患者骨髓样本中的含量高于正常对照骨髓样本，而Gb3的含量无明显区别，同时，在急性髓细胞白血病患者骨髓样本中，nLc4占Gb4和nLc4混合物的比例也明显高于正常对照骨髓样本；(3)依照临床病例资料，以急性髓细胞白血病患者的不同Franch-American-Britain（FAB）分型进行分析，发现骨髓样本中鞘糖脂的含量与FAB分型情况相关，Lc3的含量在M1（粒细胞未分化型）分型中明显高于正常对照骨髓样本，而在M2a（粒细胞部分分化型）分型中却没有明显差异，说明Lc3的含量可能与骨髓细胞分化情况有密切联系；(4)急性髓细胞白血病患者骨髓样本中Lc3合酶β1,3-N-acetylglucosaminyltransferase5（β3Gn-T5）的表达明显高于正常对照骨髓样本。结论：急性髓细胞白血病患者骨髓样本的鞘糖脂含量有别于正常对照骨髓样本，其中分化相关鞘糖脂Lc3的含量在急性髓细胞白血病患者骨髓样本中明显高于正常对照骨髓样本。第二章急性髓细胞白血病中鞘糖脂Lc3的表达与细胞分化的关系目的：研究高表达的鞘糖脂Lc3与急性髓细胞白血病的关系，观察Lc3的变化与细胞分化的相互影响，探讨急性髓细胞白血病的发病以及治疗过程中鞘糖脂Lc3的潜在作用。方法：(1)对多种白血病的细胞系进行鞘糖脂的全面分析，确定HL-60和NB4为工具细胞系进行功能试验；(2)以药物all-trans retinoic acid（ATRA）和phorbol12-myristate13-acetate（PMA）处理HL-60和NB4细胞系，使其进行细胞分化，对分化的细胞进行鞘糖脂分析，观察其变化；(3)采用RNA干扰技术，对Lc3合酶β3Gn-T5进行基因沉默，对沉默后的细胞进行鞘糖脂分析，并对细胞的分化情况进行检测。结果：(1)在各种白血病细胞系中，同样只有急性髓细胞白血病细胞HL-60和NB4有Lc3的高表达，而在非急性髓细胞白血病细胞系中，Lc3的含量相对较低；(2)经药物ATRA和PMA处理后，HL-60和NB4细胞均产生分化现象，ATRA处理后的细胞产生向粒细胞方向分化的迹象，而PMA处理后的细胞产生向单核细胞和巨噬细胞方向分化的迹象，对该分化细胞进行鞘糖脂分析，Lc3的含量有所下降；(3)用RNA干扰技术降低Lc3合酶β3Gn-T5的表达，从而降低了鞘糖脂Lc3的含量，HL-60和NB4细胞出现分化现象。结论：急性髓细胞白血病细胞系HL-60和NB4中Lc3的含量与细胞分化有密切关系，当用药物作用导致细胞分化后，Lc3的含量会有下降，同样，降低Lc3的表达后，细胞也会出现分化现象。