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前列腺癌的具体病因目前尚不完全清楚。普遍认为,前列腺癌的形成是一个多因素和多阶段的过程,是环境危险因素和遗传因素共同作用的结果。流行病学调查显示,环境危险因素暴露在前列腺癌发病中具有重要的作用,但尽管很多人接触相同的致癌危险因素,最终仅有少数人发生前列腺癌,提示个体易感性差异在前列腺癌发病过程中发挥作用。microRNAs(miRNAs)属于非编码RNA,主要通过在转录后水平调控基因表达。至今已发现的miRNA有数百种,在人类基因组中,miRNAs调控大约1/3的蛋白编码基因,控制细胞的凋亡、增殖、分化、代谢以及个体的发育和肿瘤的发生、发展以及耐药。目前,有超过50个miRNAs被发现在前列腺癌中异常表达,包括miR-146a。另外,位于miR-146a前体基因序列上的一个单核苷酸遗传变异(single nucleotide polymorphism, SNP)被发现影响成熟miR-146a的生成和功能。因此,我们推测miR-146a遗传变异可能与前列腺癌的发生发展有关。本研究旨在通过分子流行病学和分子生物学相结合的手段,对miR-146a遗传变异与前列腺癌遗传易感性的关系以及miR-146a在前列腺癌发生发展中的作用进行系统性研究,结果对于进一步阐释前列腺癌的发病机制,筛选前列腺癌的生物标志物以及对今后实施目标明确的个体化预防和干预等方面都具有重要的目的:有研究显示miR-146a可能与前列腺癌发生发展有关。rs2910164位于miR-146a前体(pre-miR-146a)序列上,碱基G>C的突变导致其茎环区域G:U到C:U的错配,可能影响成熟miR-146a的表达。为了探讨rs2910164是否与前列腺癌的发生发展有关,我们研究了这一遗传变异与中国苏皖地区汉族人群前列腺癌易感性的关系,并且检测了其对成熟miR-146a体内和体外表达的影响。方法:通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对251例中国苏皖地区汉族前列腺癌患者和280例年龄和地区匹配的正常对照人群进行了肿瘤相关性研究,并通过实时定量PCR法检测了携带不同基因型患者前列腺癌组织中成熟miR-146a表达情况,以及构建含有不同等位基因型的质粒瞬时转染前列腺癌细胞株DU145和PC3细胞,用实时定量PCR法检测转染不同等位基因型质粒的DU145和PC3细胞中成熟miR-146a表达情况。结果:在肿瘤相关性的研究中,携带CC基因型的个体与携带GG/GC基因型的个体相比,患前列腺癌的风险下降35%(OR = 0.65, 95% CI = 0.43-0.99)。并且,携带CC基因型的前列腺癌患者的前列腺癌组织中成熟miR-146a的表达量明显低于携带GG/GC基因型的前列腺癌患者的组织(P < 0.05)。瞬时转染携带G等位基因型质粒的DU145和PC3细胞内成熟miR-146a的表达量是瞬时转染携带C等位基因的质粒的1.75倍(P < 0.05)和1.61倍(P < 0.05)。结论:miR-146a遗传变异与中国苏皖地区汉族人群前列腺癌的易感性有关,并且能够影响体内和体外成熟miR-146a的表达。目的:文献报道miR-146a可能与前列腺癌发生发展有关,并参与前列腺癌细胞由激素依赖向激素非依赖的转化。探讨miR-146a对前列腺癌激素非依赖前列腺癌细胞株DU145和PC3增殖、迁移以及药物敏感性的影响,并鉴定miR-146a调控的下游靶基因,研究miR-146a缺失导致前列腺癌发生发展的分子机制。方法:实时定量PCR检测激素非依赖前列腺癌和激素依赖前列腺癌组织中miR-146a的表达差异。体外转染miR-146a后,分别通过MTT实验和体外克隆形成实验检测DU145和PC3细胞增殖能力的改变;通过迁移实验检测DU145和PC3细胞迁移能力的改变;通过裸鼠成瘤实验检测miR-146a对细胞移植瘤生长的影响;通过将DU145和PC3细胞加入0.1-200μM的顺铂培养,MTT法检测吸光值,并计算半数抑制率(IC50)比较miR-146a对顺铂药物敏感度的影响;通过miR-146a靶基因预测软件miRanda预测miR-146a在前列腺癌的潜在靶基因表皮生长因子受体(EGFR);分别检测miR-146a和EGFR 3’UTR结合能力。转染miR-146a后,应用Western blotting检测miR-146a靶基因EGFR表达以及p-ERK和MMP2的表达,进一步检测下游基因的表达情况。结果:实时定量PCR结果表明,激素非依赖前列腺癌组织中miR-146a的表达水平与激素依赖前列腺癌组织相比显著下降(P < 0.05)。MTT实验表明在激素非依赖前列腺癌细胞DU145和PC3中高表达miR- 146能够抑制前列腺癌细胞的增殖能力(P < 0.05)。在体外克隆形成实验中,miR-146a可以抑制前列腺癌细胞DU145和PC3形成克隆的数目和大小(P < 0.05)。在裸鼠成瘤实验中,转染miR-146a的DU145细胞裸鼠皮下肿瘤的大小明显小于对照组(P < 0.05)。在Transwell迁移实验中,转染miR-146a后的前列腺癌细胞迁移通过transwell小室的数量明显减少(P < 0.05)。在药物敏感实验中,miR-146a可增加前列腺癌细胞DU145对顺铂的化疗敏感性。荧光素酶报告基因结果表明,在共转染miR-146a和pMir-reporter-EGFR质粒后,荧光报告基因的荧光强度受到明显抑制(P < 0.05),而共转miR-146a和pMir-reporter-NC质粒、共转NC mimics和pMir-reporter-EGFR质粒、共转NC mimics和pMir-reporter-NC质粒后,荧光报告基因的荧光强度基本不受影响。采用Western blotting检测潜在靶基因EGFR以及下游基因的表达情况后,发现miR-146a抑制EGFR以及p-ERK和MMP2的表达。结论:以上结果表明miR-146a能够抑制激素非依赖前列腺细胞DU145和PC3的增殖、迁移能力,增加DU145和PC3对顺铂的化疗敏感度。癌基因EGFR是miR-146a潜在靶基因,miR-146a能够通过作用于EGFR 3’-UTR抑制EGFR的表达,调控EGFR-ERK信号通路,从而发挥抑癌基因的作用。