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目的 发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)是近年来我国新发现布尼亚病毒科白蛉病毒属的病毒,迫切需要阐明SFTSV的感染机制和致病机理,这对于制定有效的预防和治疗措施具有重要意义,但目前在这方面的研究尚缺乏。本研究从发热伴血小板减少综合征病人的血清样本中获得miRNA的表达谱,并建立THP-1细胞感染模型初步探寻表达差异的miRNA与SFTS病毒感染的关联性,有助深入理解及研究SFTS病毒感染的致病机理、疾病进程以及免疫功能等,可为临床防制、新型抗病毒治疗方式的开发提供参考。方法1)鉴定感染患者血清microRNAs的差异表达,通过TaqMan低密度芯片(TLDA)获得血清miRNA的表达谱,用定量RT-PCR(qRT-PCR)进行验证,分析和鉴定病毒感染和宿主免疫应答的相关miRNAs。 2)建立THP-1细胞SFTSV体外感染模型,分析表达显著改变的miRNAs以及mRNAs表达水平,并结合生物信息学,预测差异表达miRNA的功能,试图从病毒蛋白作用、宿主与病毒相互作用、宿主自身状态等角度探究病毒感染发病机制。应用实时荧光定量PCR的方法进行miRNA表达的验证,以进一步确认与病毒感染相关的microRNA。结果1)分析血清TLDA芯片结果,发现与正常人血清相比,SFTS血清表达上调超过2倍的miRNA有117个,表达下调超过2倍的miRNA有30个。其中,变化倍数在2-4之间的有22个,变化倍数在4-10之间的有25个,10-40倍之间的有27个,40-200倍之间的有14个,超过300倍的有32个。对表达差异较为明显的miRNA进行分析,发现22个与病毒感染或免疫功能相关的miRNA,其中上调的有20个,下调的有2个。使用qRT-PCR技术验证了我们在TLDA芯片表达谱差异表达miRNA中选出的22种候选miRNA的表达量。经过定量RT-PCR验证,显示显著变化的9种表达差异miRNA (miR-146a、miR-15b、miR-24、miR-628-5p、 miR-101、miR-126、miR-155. miR-221、miR-34a)。2)借助于AffymetrixmiRNA芯片,以THP-1细胞作为SFTSV体外感染模型,分析表达显著改变的miRNA以及mRNA表达水平,在最终548个靶基因中发现16个差异表达miRNA具有调控的靶基因,上调miRNA13个,hsa-miR-149,, hsa-miR-155, hsa-miR-1915, hsa-miR-28-3p, hsa-miR-221, hsa-miR-193b, hsa-miR-146a, hsa-miR-628-5p, hsa-miR-29a, hsa-miR-132, hsa-miR-1908, hsa-miR-638, hsa-miR-1469:下调miRNA3个,hsa-miR-1307, hsa-miR-345, hsa-miR-320a。靶标TOLL信号通路中重要调控因子(如TNF、CAT、IL1B、STAT1、 CCL5、MAP3K11、CD81、LITAF、CARD9)及对抗药物反应因子SLC1A3、CENPF。并且在THP-1细胞水平中采用qRT-PCR验证了miR-146a、miR-155的差异表达。采用MAS3.0软件对上/下调miRNA调控的靶基因分别进行GO/KEGG功能注释分析。上调与下调miRNA调控的靶基因KEGG功能注释分析发现,这些基因参与调控的信号途径有抗原加工、宿主对抗、细胞因子相互作用、信号传导等。结果提示差异表达的miRNA可能与SFTSV感染相关的主要信号通路的重要基因相关。结论本研究从血清与细胞水平,分析与SFTSV感染相关差异表达miRNA,首次从miRNA角度初步探寻SFTS病毒感染的分子致病和免疫机理,并为研发有效疾病防控与治疗措施提供参考。