鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌PFGE分型及耐喹诺酮类药物gyrA基因突变分析

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空肠弯曲杆菌(Campylobacter ieiuni, C.jejuni)是一种重要的食源性病原菌,食用受到污染的食品可引起腹泻或食物中毒,严重的可导致败血症、反应性关节炎、格林巴利综合症等,这些疾病都离不开抗生素的治疗,然而随着各种抗生素的广泛使用,空肠弯曲杆菌对抗生素的耐药性已引起世界的广泛关注。因此,本文从雅安养鸡场、屠宰场和市场中分离收集空肠弯曲杆菌,对鸡肉生产链(养殖场-屠宰场-市场)中空肠弯曲杆菌的污染及耐药情况、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和耐喹诺酮类药物gyrA基因突变检测进行了分析。参考GB/T4789.9-2008、SN0175-2010、ISO10272-1:2006、FDA/BAM:2001、 USDA/FSIS:1998等方法,从鸡肉生产链中采集样品519份,分离鉴定出空肠弯曲杆菌180株,分离率为34.87%。其中,养鸡场和屠宰场鸡粪样空肠弯曲杆菌分离率分别为74.29%和66.38%,屠宰场和市场的鸡肉样中空肠弯曲杆菌的分离率分别为17.33%和13.66%。采用肉汤微量稀释法,空肠弯曲杆菌对8种抗生素(组合)的药敏实验结果表明,180株空肠弯曲杆菌对环丙沙星、左氟沙星、四环素和克林霉素的耐药率较高,分别为94.44%、93.89%、91.67%和78.33%;对红霉素(20.00%)、链霉素(20.56%)、庆大霉素(17.78%)、氟苯尼考(12.22%)呈现出不同的耐药率;多重耐药率为100%。从养殖场到市场,鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌对上述8种抗生素的耐药率呈持平或上升趋势。鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌的污染严重,对喹诺酮类药物、四环素和克林霉素的耐药率较高。采用Sma I对83株空肠弯曲杆菌进行PFGE分型,通过Info Quest(?) FP (version5.0)指纹图谱分析软件的聚类分析,结果产生了45种不同的谱型。基因分型结果表明空肠弯曲杆菌在鸡肉生产链中存在水平传播现象,部分耐药表型相同的菌株其基因型相似度较高,说明空肠弯曲杆菌的耐药表型与基因型之间有一定的相关性。采用错配扩增突变分析PCR (MAMA PCR)技术,检测137株耐环丙沙星的空肠弯曲杆菌的gyrA基因257位突变情况,结果有131株空肠弯曲杆菌在gyrA基因257位发生点突变,检测突变率为95.62%。10株对环丙沙星敏感的菌株均没有检测出gyrA基因的突变。gyrA基因耐药决定区的测序结果表明对环丙沙星耐药的菌株MJF31和MJF53都在第257位碱基发生了C→T(苏氨酸到异亮氨酸)的突变,而对环丙沙星敏感的菌株JF9和JF136均未发生C→T(苏氨酸到异亮氨酸)突变。本研究分析了鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌的污染和耐药情况,为监测空肠弯曲杆菌的污染情况和耐药性提供了基础数据;对鸡肉生产链中的空肠弯曲杆菌进行PFGE分型,为研究空肠弯曲杆菌在食品链中的传播机制奠定了基础,同时采用MAMAPCR技术对耐喹诺酮类药物的空肠弯曲杆菌的gyrA基因进行了检测,为研究细菌耐药性的产生机制提供了参考。论文研究结果具有一定的理论意义和实际应用价值。
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