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机体的免疫系统与肿瘤的相互作用是一个多层次、多种物质参与的此消彼长的过程。在正常情况下，机体有强大的免疫系统，能识别和排除肿瘤细胞，但临床上肿瘤病人确屡见不鲜，肿瘤细胞可不停地在体内生长，最后杀死宿主。一般认为这是肿瘤细胞逃避了机体免疫监视。肿瘤逃避免疫监视的机制非常复杂，但总体上可从宿主免疫状态及肿瘤细胞等方面来解释，在宿主免疫状态低下时，肿瘤细胞可以被动地逃避免疫监视，但是肿瘤细胞也能主动地释放一些活性物质，下调免疫杀瘤作用，该作用主要通过两个途径，即对免疫细胞功能的调节和免疫细胞数量的调节。本课题的主要目的是：在体外模拟体内肿瘤的微环境，观察免疫细胞的细胞增殖、凋亡、活性、细胞因子及NO的变化及作用，明确肿瘤对免疫系统的作用及机制。 1．基于目前测定免疫细胞增殖杀伤的方法的局限性，本研究首先建立一种用流式细胞仪测定该指标的新方法。通过对该方法的验证，证明该方法具有：a，不受所测细胞代谢状态的影响：b，在细胞介导的细胞毒性试验中，能区分靶细胞和效应细胞；c，操作步骤少并无放射性；d，具有高灵敏度和可信性。 2．结合以上创建的方法和免疫荧光流式细胞术，用K562细胞株可溶性分泌物(上清)对外周血单个核细胞(PBMC)进行培养以模拟体内微环境，然后分别从细胞增殖、凋亡、坏死、细胞周期、活性、细胞因子和表面抗原表达等方面进行研究，结果发现用肿瘤上清培养的PBMC细胞数量下降明显，但同时对其有激活作用，且呈剂量依赖性；细胞数的下降主要是由细胞坏死和凋亡引起的，肿瘤上清对细胞周期没有阻断作用，反而略有促进作用；T细胞亚群比例增加，并促进表达Th1、Th2细胞因子。这说明K562细胞主要是通过使免疫细胞减少来逃避免疫监视的，这为抗肿瘤研究提供了基础。 3．利用DAF-2DA作为细胞内NO特异性的荧光探针，研究了K562上清对PBMC产生NO的影响，国内未见类似报导，发现肿瘤上清能促进PBMC细胞NO的产生，进一步发现活化的细胞(CD69+)均产生NO，而NO阳性的细胞不一定活化的。说明NO在肿瘤对PBMC的作用中起到一定的作用。 4．利用NO合酶抑制剂L-NAME和NO供体SNP，研究NO在K562上清对PBMC的作用中所发挥的作用。0刀smM的SWh有活化PBMC的作用，大于0．SInM的SNP会大量诱导PBMC的坏死，但对细胞因子、细胞周期、细胞亚群的比例均影响不大。这说明低剂量的NO是PBMC细胞生理活动所必须，而高浓度NO会损害PBMC细胞甚至导致死亡。在K562上清对PBMC作用中，产生的高浓度NO所起的作用也许仅仅是诱导了PBMC的坏死。 本研究结论是K562上清对免疫的抑制是通过减少免疫细胞而起作用的，其中NO起了较大的作用。本研究的创新点在于：l、建立了用流式细胞术定量测定细胞增殖和细胞毒性的直接检测技术；2．发现K562可溶性分泌物剂量依赖性地使PBMC细胞数量减少但活性增加；3、K562可溶性分泌物能诱导PBMC产生NO，但是NO的作用并不等同于肿瘤上清的全部作用。4、为抗肿瘤药物筛选提供了一个体外模型，并明确了一些筛选指标。