烷基糖苷的生物合成

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烷基糖苷(APG)作为一种安全性较高、可生物降解、对环境友好的非离子型表面活性剂,最早使用于洗涤剂工业,而高纯度的烷基糖苷在日用化学品原料、药物和生物制剂等众多高端领域有着十分广阔的应用前景,具有很好的研究价值。本课题研究以长链醇和葡萄糖为原料,采用表达β-葡萄糖苷酶基因工程菌作为全细胞催化剂,合成烷基糖苷。研究了全细胞催化合成正辛基葡糖苷、正己基葡糖苷的反应条件、影响因素及其分离提纯方法,主要研究内容和结果如下:研究了运用乳糖取代IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导β-葡萄糖苷酶在基因工程菌中表达的可行性,通过摇瓶实验对其培养基成分和培养方式进行了优化。在酵母粉0.7%、Na2HPO4 0.7%、甘油0.5%、葡萄糖0.07%、种子液接种量为3%,乳糖诱导浓度为2%,乳糖诱导时机为2 h,诱导温度为34℃,调节培养基pH至7、诱导时间为4 d的条件下,酶活可达157.9 U/mL,约为使用IPTG诱导的5.42倍。采用表达β-葡萄糖苷酶的全细胞催化剂,以长链醇和葡萄糖作为原料催化合成正辛基葡糖苷、正己基葡糖苷。在葡萄糖与正辛醇的质量比为1:5(g/g),催化剂的用量为原料总质量的2.0%,反应温度为52℃,反应时间为36 h,控制pH为6,摇床转速为180 r/min等条件下,葡萄糖转化率为62.12%。通过红外光谱、拉曼光谱、核磁共振氢谱对产物进行结构鉴定,确定合成产物为正辛基葡糖苷,通过柱前衍生-气相色谱法检测分离后的正辛基葡糖苷纯度。在葡萄糖与正己醇的质量比为1:5(g/g),催化剂的用量为原料总质量的1.5%,反应温度为52℃,反应时间为36 h,控制pH为5,摇床转速为180 r/min等条件下,葡萄糖转化率为73.27%。通过红外光谱对产物进行结构鉴定,确定合成产物为正己基葡糖苷,通过柱前衍生-气相色谱法检测分离后的正己基葡糖苷纯度。
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