论文部分内容阅读
目的：本课题旨在通过动物实验,比较各治疗组小鼠刻板行为的改善情况,评价多巴胺D3受体(dopamine D3 receptor, DAD3R)激动剂BP897对多发性抽动症(Tourette’s syndrome,TS)的治疗疗效及有效剂量,为治疗TS提供相应动物实验依据；研究BP897对TS模型小鼠脑组织DAD3R、多巴胺转运蛋白(dopamine transporter, DAT)和多巴胺(dopamine, DA)的影响,探讨BP897治疗TS可能的作用机制。方法：1、实验分组：将72只雄性ICR小鼠随机分为：正常对照组、模型组、阳性对照组(氟派啶醇0.5mg/kg). BP897Ⅰ组(0.3mg/kg)、BP897Ⅱ组(1.0mg/kg)、BP897Ⅲ组(3.0mg/kg),每组各12只ICR小鼠。2、动物模型制作：TS模型采用Diamond等创立的神经毒素全身用药法建立,即将亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)溶于生理盐水中,给药剂量为200mg/kg.d,给药体积为0.1ml/100g,给药途径为腹腔注射,每天1次,连用7天,正常对照组予等量生理盐水腹腔注射。3、刻板行为评分：从实验第8天起逐日分别以生理盐水、氟哌啶醇和(或)BP897灌胃,1次/天,共28天,同时于造模成功即刻、灌胃7天、灌胃28天采用双盲法开始对小鼠进行刻板行为评分,3次/天(集中于夜间,因小鼠习惯夜间活动),每次计时5min,取平均值。评分标准如下：0分：无刻板行为(与正常小鼠行为无差别)；1分：旋转运动；2分：垂直的头部和颈部的运动障碍(上下运动过多)；3分：垂直的头部和颈部的运动障碍加旋转运动；4分：头向侧摆并伴有头颈部上下运动过多4、检测指标：小鼠脑组织DAD3R、DAT和DA的含量。5.组织病理切片：1)材料：正常对照组和模型组ICR小鼠大脑组织。2)方法：以上组织均用10%的甲醛固定,石蜡包埋,6μm切片,HE染色,光镜检查。结果：1、BP897对小鼠刻板行为的影响：给药7天和28天,分别对各组小鼠进行刻板行为评分,结果显示：中、高剂量BP897组小鼠较模型组小鼠刻板行为有所改善,但高剂量BP897组小鼠较中剂量组小鼠改善更明显,其作用效果与阳性对照物氟哌啶醇一致(P>0.05),低剂量BP897组与模型组相比差异无显著性(P>0.05)。2、BP897对TS模型小鼠脑组织DAD3R含量的影响：BP897连续给药28天后,用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织DAD3R的含量,结果显示：大剂量BP897组脑组织DAD3R含量与模型组相比明显增高(P<0.05),而低于氟哌啶醇组(P<0.05),氟哌啶醇组与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05),模型组脑组织DAD3R含量明显低于正常对照组(P<0.05),与中、低剂量的BP897组相比差异无显著性意义(P>0.05)。3、BP897对TS模型小鼠脑组织DAT含量的影响：BP897连续给药28天后,用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织DAT的含量,结果显示：大剂量BP897组脑组织DAT含量与模型组相比明显增高(P<0.05),而低于氟哌啶醇组(P<0.05),氟哌啶醇组与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05),模型组脑组织DAT含量明显低于正常对照组(P<0.05),与中、低剂量的BP897组相比差异无显著性意义(P>0.05)。4、BP897对TS模型小鼠脑组织DA含量的影响：BP897连续给药28天后,用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织DA的含量,结果显示：大剂量BP897组脑组织DA含量与模型组相比明显增高(P<0.05),而低于氟哌啶醇组(P<0.05),氟哌啶醇组与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05),模型组脑组织DA含量明显低于正常对照组(P<0.05),与中、低剂量的BP897组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论：本实验表明1.0～3.0mg/kg的BP897对治疗小鼠TS有效,而3.0mg/kg的BP897能更好地控制刻板行为,其疗效与氟哌啶醇相当,0.3mg/kg的BP897并不能明显改善刻板行为。不同剂量的BP897的疗效差异可能与其低剂量时选择性激动DAD3R,中剂量时在激动DAD3R的基础上拮抗少量DAD2R (dopamine D2 receptor, DAD2R),高剂量时在激动DAD3R的基础上拮抗大量DAD2R有关。而BP897改善TS小鼠刻板行为的详尽机制尚需进一步研究。