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目的：筛选和鉴定BTCC患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因并对部分基因进行多样本的验证分析。方法：选取甘肃省人民医院泌尿外科2005年12月-2007年10月确诊的10例BTCC患者术前晨起中段尿200m1,术前均未做化疗,同法取10例健康志愿者尿液作为对照。分离BTCC癌患者与正常人尿液中总mRNA,用SSH方法构建差异表达基因的cDNA消减文库并制备重组质粒的cDNA芯片。进一步使用地高辛标记的尿脱落细胞扩增产物作为探针与此文库进行杂交,挑选部分杂交显色结果有差异的克隆进行测序分析及同源性比对。利用表达基因分类数据库(EGAD)初步将这些基因进行分类整理。应用RT-PCR、MSP及Western blot方法分别对BTCC检测芯片中的PTEN、RUNX3和DNA错配修复系统hMLH1、hMSH2和hMSH3基因进行多样本的验证分析,探讨该组标志物与BTCC生物学行为的关系。结果：成功构建了含762个克隆的膀胱癌尿脱落细胞差异表达基因消减cDNA文库。对克隆生长情况及质粒插入效率鉴定提示每一克隆都载有特异片段的可能性。消减文库中58.9%的克隆代表着不同的基因,未发现G3PDH管家基因,证实建库成功。进一步使用地高辛标记的扩增产物作为探针与此文库所制备的cDNA芯片进行正、反向杂交,初步筛选出差异表达克隆112个,对这112个克隆进行测序,除去4个克隆测序失败和41个重复克隆外,获得可分析的基因为67个,利用EGAD数据库初步对这些基因进行了分类整理。BTCC检测芯片中PTEN、RUNX3和DNA错配修复系统hMLH1、hMSH2和hMSH3基因验证分析结果表明：PTEN、RUNX3 mRNA和蛋白表达在32例正常膀胱组织和BTCC组织中分别为93.8%/15.6%,93.8%/34.4%(P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。hMLH1、hMSH2、hMSH3 mRNA在癌组织中表达率分别为46.9%、37.5%、18.8%,在正常组织的表达率分别为21.9%、65.6%、0%,两者之间差异均有统计学意义(P<0.01),并且随肿瘤病理分级的增加呈下降趋势(P<0.05),均与临床分期不相关(P>0.05)。PTEN、RUNX3基因甲基化率在BTCC组织中分别为65.6%、46.9%,正常膀胱组织中均未见表达。BTCC组织中hMSH1、hMSH2的甲基化阳性率分别为37.5%、53.1%,且存在部分甲基化现象,hMSHl基因G1+G2组甲基化阳性率高于G3组,差异具有统计学意义(P<0.05),与临床分期无关。hMSH2随病理分级的增加呈递减趋势(P<0.05),与临床分期无相关(P>0.05)。所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。结论：BTCC尿脱落细胞抑制消减杂交cDNA文库制备cDNA芯片,对于识别膀胱肿瘤和正常尿路上皮是一个强大的配置方法,利用从尿液总RNA获得的多基因表达信号,能够更好地诊断膀胱癌,并且能够提供更多的疾病特征和诊断资料。