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[目的]：建立一种能区分PRRS灭活疫苗免疫猪群和野毒隐性感染猪群的PRRS血清抗体ELISA检测方法，为PRSS的临床诊断与预防控制提供参考依据。 [方法]：针对PRRSVNsp10基因合成特异性引物，采用RT-PCR方法对本实验室保存的PRRSVJL分离株核酸提取物进行扩增，回收纯化PCR产物，克隆至pMD18-T载体中，构建重组质粒pMD18-T-Nsp10，将PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序分析。 采用双酶切方法获取目的基因片段，插入原核表达载体pET-32a上，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经不同诱导时间和不同IPTG浓度优化后，对表达产物进行SDS-PAGE和Western-Blotting检测。 采用His·BindPurificationKit对表达产物进行纯化，用作包被抗原，进行各种反应条件的优化，建立一种基于PRRSVNsp10蛋白的间接ELISA方法，并与现行使用的基于N蛋白抗体ELISA检测试剂盒进行比较。 [结果]：RT-PCR扩增结果可见一条与预期大小(717bp)相一致的DNA条带；将目的基因连接至pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α，提取重组质粒进行双酶切，可观察到大小约为2600bp的载体带和717bp的目的带；取阳性重组质粒进行测序显示，Nsp10基因cDNA全长为699bp，可编码233个氨基酸。 应用生物信息学软件分析结果表明，PRRSVJL株Nsp10基因与PRRSV早期分离株的核苷酸同源性为91.7％～94.0％，氨基酸同源性为97.4％～98.7％；与新近流行毒株的核苷酸同源性为98.3％～98.6％，氨基酸同源性为99.6％～100％。编码的Nsp10蛋白无跨膜结构，含许多抗原指数较高的区域、亲水区域和表面可及性区域，含有9个潜在的抗原决定簇，具备形成抗原表位的良好条件。 将Nsp10基因克隆至表达载体pET-32上，转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达结果显示，在43.4KDa处可见到明显的目的蛋白带，最佳的诱导表达条件是：诱导表达时间4h，IPTG诱导浓度0.2mmol/L；目的基因的表达产物主要以包涵体形式存在，将表达产物进行Western-Blotting检测，结果显示重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。采用尿素溶解、His·BindPurificationKit纯化后，可得到较纯的Nsp10重组蛋白；取重组蛋白作为包被抗原，建立ELISA方法，结果显示其最佳反应条件是：重组蛋白包被浓度为7.37μg/mL，血清稀释度为1:40，封闭液和血清稀释液以5％脱脂乳为佳，酶标二抗稀释度为1:1000，阴阳性血清临界值为0.32。 应用本次建立的ELISA方法对猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病、猪乙型脑炎、猪口蹄疫及猪圆环病毒感染等阴、阳性血清进行检测显示，只有猪繁殖与呼吸综合征阳性血清OD450值≥0.32，而其它血清样本OD450值均小于0.32；对3份PRRS阳性血清和1份阴性血清进行5次重复检测，其变异系数为2.5％～7.1％；对不同稀释度的阳性血清样本进行检测，结果稀释度为1:800的血清样本仍为阳性。 与N蛋白抗体ELISA检测试剂盒的检测结果参照显示，对于90份PRRS灭活疫苗免疫猪血清样本，用本试验建立的ELISA方法检测抗体阳性率为2.22％(2/90)，基于N蛋白检测试剂盒检测的血清抗体阳性率为27.77％(25/90)，两者检测结果差异较大；对于113份未免猪血清样本，本试验建立的ELISA方法检测血清抗体阳性率为22.12％(25/113)，基于N蛋白检测试剂盒检测结果为25.66％(29/113)，差异不明显。 [结论]： (1)成功克隆出PRRSV贵州JL株的Nsp10基因，经生物信息学软件分析显示该基因编码的Nsp10蛋白具有良好的抗原性。 (2)成功构建了PRRSVJL株Nsp10基因的pET-32a原核表达载体并在大肠杆菌中得到了有效的表达。 (3)成功建立了基于PRRSVNsp10蛋白抗体的间接ELISA检测方法，该方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性，基本可以区分PRRS灭活疫苗免疫猪群和隐性感染猪群。