细菌性阴道病(bacterial vaginosis,简称BV)是妇产科常见疾病,对妇女危害较大,在妇科、产科及施行外科流产术前对BV进行快速有效的诊断具有十分重要的意义。检测BV使用的样本为阴道分泌物,其成分比较复杂,再加上BV本身不是单一细菌而是厌氧菌群感染,这就给BV检测带来很大困难,目前国内临床上尚缺乏快速有效的产品诊断BV。国外开发的BVblue产品,用酶法检测BV使此难题得以突破,但其成本高,漏检、操作复杂等因素影响其在国内的推广应用。为了满足国内对BV快速检测的需求,本论文主要用干化学酶法研制了细菌性阴道病联合试剂盒,以期获得灵敏度好、特异度高、方便、快速、经济的产品,应用于女性阴道疾病BV的诊断。研究方法和结果:1.主要原材料研究:设计了专用反应板、比色卡、对载体、底物、质控品进行筛选,并制定了相应的质量标准。2.主要工艺研究:筛选出4-氨基安替吡啉、唾液酸底物B、L-脯氨酸对硝基苯胺、溴甲酚绿作为过氧化氢、唾液酸苷酶、脯氨酸氨肽酶和pH值指标的底物,通过系列正交实验和优化实验获得每个指标的最佳配方。最终形成了产品的工艺流程图。3.体系研究:样本为阴道分泌物,加样量为30μl,反应时间为37℃15分钟,结果读取时间为温育结束后5分钟内。4.分析性能研究:对三批试剂盒分别进行检测限、特异性、准确性、重复性及批间差的考核,均满足要求。5.稳定性研究:试剂盒37℃加速破坏9天性能符合要求;模拟运输37℃震荡7天性能符合要求;实时稳定性12个月性能符合要求;反应板拆封后可稳定4小时;阴道分泌物样本采集后应在1小时内使用。6.阳性判断标准的确定:检测100份正常样本和各50份过氧化氢、脯氨酸氨基肽酶、唾液酸苷酶阳性样本,使用ROC曲线法确定这3个指标的阳性判断标准。7.临床研究:检测681例临床样本,BVblue试剂盒和Amsel法金标准对比结果有显著性差异,灵敏度为85.58%;本试剂盒唾液酸酶孔结果与BVblue试剂盒结果无明显差异;本试剂盒4个指标联合检测结果与Amsel法金标准对比,灵敏度为98.08%,特异性为99.48%,阳性预测值为97.14%,阴性预测值为99.65%,总符合率为99.27%。因此本试剂盒比BVblue试剂盒检出率高性能更好。结论:自行研制的细菌性阴道病联合试剂盒,方便快捷、性能稳定、灵敏度高、特异性好,能较好的应用于临床BV的诊断。