骨关节炎（OA）是一种广泛存在的慢性关节疾病,具有关节结构退行性病变和炎症反应的特征,伴随着关节疼痛、僵硬、肿大、无力的临床表现,甚至导致残疾,严重危害人体健康。川牛膝是著名的川产道地药材,属于我国卫生和健康委员会规定的可用于保健食品的中国传统药材。川牛膝具有降血压、免疫调节、抑菌、抗氧化、抗炎、治疗骨质疏松等药理活性,临床上常用于治疗风湿疼痛,跌打损伤,血瘀经闭等症状。甾酮类成分是川牛膝中的重要活性物质,本课题分别以碘乙酸钠（MIA）诱导的大鼠OA模型和白介素-1β（IL-1β）诱导的软骨细胞模型,从动物和细胞层面探究了川牛膝中主要活性成分杯苋甾酮的软骨保护作用。并以川牛膝为原料,以有效成分杯苋甾酮的含量和浸出物的得率作为质量控制指标,对提取工艺进行优化,开发了一款符合现代人类饮食结构的功能性保健口服液。研究结果如下:1.采用MIA诱导大鼠体内OA模型,分为4组:空白对照组、MIA模型组、杯苋甾酮处理组（10 mg/kg）、地塞米松阳性对照组（0.1 mg/kg）。连续灌胃28天,通过测量膝关节肿胀度,解剖观察膝关节大体形态,对软骨组织进行病理切片染色并评分,以研究杯苋甾酮对OA大鼠的软骨保护作用。结果发现,杯苋甾酮能够显著降低MIA引起的膝关节肿胀度,并减轻MIA导致的软骨损伤,主要表现为减轻软骨结构破坏,保持软骨潮线完整性,抑制软骨细胞异常增生或凋亡。2.通过II型胶原酶消化法分离提取得到大鼠原代软骨细胞,并利用II型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色,结合培养过程中细胞的生长形态,鉴定软骨细胞。利用IL-1β（10 ng/m L）诱导软骨细胞,建立体外OA模型。采用MTT法、流式细胞术、qPCR、western blot、免疫荧光等生物技术考察杯苋甾酮在体外对软骨细胞的保护作用。结果发现,杯苋甾酮（5,10μM）能够抑制IL-1β引起的细胞凋亡,并在一定程度上逆转IL-1β所致的炎症反应和软骨基质降解。对于IL-1β激活的NF-κB通路,杯苋甾酮能够抑制NF-κB通路的关键蛋白IκBα和p65的磷酸化,并抑制细胞质内的p65向细胞核迁移。进一步采用NF-κB抑制剂BAY 11-7082处理软骨细胞,发现p65蛋白的磷酸化水平以及炎症因子MMP-3、MMP-13、i NOS和COX-2的蛋白表达水平明显低于单独使用IL-1β处理的软骨细胞。这些结果首次表明杯苋甾酮能够以类似于抑制剂BAY 11-7082的方式调节NF-κB通路,从而发挥软骨保护作用。3.川牛膝口服液工艺研究:以川牛膝为原料,回流提取得到醇提液,浓缩后加入矫味剂、防腐剂,分装后灭菌,即得。通过高效液相色谱法检测有效成分杯苋甾酮的含量,干燥法测定浸提物得率,作为口服液的质量指标。设计单因素实验对制备工艺过程中回流提取的醇浓度、料液比、提取次数、提取时间和浓缩方式,甜味剂（甜菊糖苷）和防腐剂（山梨酸钾）的添加量,以及灭菌条件进行了考察。确定川牛膝口服液最佳制备工艺为:加入原料20倍量的70%乙醇,100℃回流提取2次,每次60 min,合并滤液,减压浓缩（70-75℃）至相对密度为1.20-1.25（含醇量40%-50%）,加入0.2%甜菊糖苷、0.1%山梨酸钾进行调配,按每支10 m L灌封于棕色玻璃瓶,采用高压蒸汽灭菌,即得。