研究背景：消化道肿瘤的发病率逐渐成上升趋势,结直肠癌的发病率在各种消化道肿瘤中已升至第2位。由于早期缺乏典型的症状和体征,给诊断带来一定的困难,临床上就诊的大部分患者属于中、晚期结肠癌,多失去手术机会。结肠癌患者的主要死因是肿瘤复发及肝脏转移,因此早期认识结肠癌有无转移、转移途径以及转移范围对于指导临床治疗、提高结肠癌患者的预后具有重要意义。近年来,非细胞毒性药物在肿瘤治疗中的作用备受关注,其中COX-2抑制剂抑制肿瘤生长的研究已取得较大进展。塞来昔布是一种高选择性的COX-2抑制剂,对COX-2的抑制强度为COX-1的375倍,与非选择性的COX-2抑制剂相比,胃肠道出血等不良反应的发生率明显降低。COX是花生四烯酸代谢中的重要限速酶,分为两种异构体：COX-1和COX-2。COX-1在大多数细胞和组织中稳定表达,主要起维持正常生理功能的作用。而COX-2是一种可以诱导表达的酶,在大多数正常组织中表达呈阴性,当细胞受损伤或其他刺激的情况下可大量增加。COX-2与人类多种肿瘤密切相关,参与调控肿瘤发生和发展的多种机制。它可以抑制肿瘤细胞凋亡,抑制宿主的免疫应答,逃避对肿瘤细胞的免疫监视,并可促进肿瘤血管生成及肿瘤复发和转移。人OPN基因是单一编码基因,位于染色体4q13上。Yeatman等在综合研究新的有关肿瘤和肿瘤进展的标志物时,通过应用基因表达图谱技术筛选大约12000个基因,最终确定OPN为临床上结肠癌首选的生物学标记。OPN与肿瘤的发生发展关系密切,它可以促进肿瘤细胞的趋化、粘附,抑制肿瘤细胞的凋亡,促进细胞外基质降解,促进肿瘤血管的形成。OPN的过表达与肝癌、乳腺癌、胃癌等肿瘤的恶性程度、转移、早期复发等有关。对OPN的研究逐渐成为肿瘤治疗的一个热点。目前选择性COX-2抑制剂抑制结肠癌细胞增殖,诱导结肠癌细胞凋亡是肿瘤学专家们关注的研究领域之一,一些学者已进行了富有成效的探索,但选择性COX-2抑制剂抗结肠癌的确切分子机制至今尚不十分清楚。本课题研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布对HT-29结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为塞来昔布抗结肠癌的临床应用提供实验依据。第一章：结肠癌中骨桥蛋白与环氧化酶-2的表达及临床意义目的研究骨桥蛋白(OPN)与环氧化酶-2(COX-2)在结肠癌组织中的表达水平,并探讨两者与结肠癌转移浸润的关系。方法应用免疫组化法检测60例结肠癌组织和16例癌旁正常组织中OPN与COX-2的表达,并分析二者的表达水平与临床病理特征的关系及二者的表达相关性。结果1.OPN和COX-2在结肠癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁正常结肠组织。2.OPN和COX-2蛋白的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关,与肿瘤分期、淋巴结转移有关,二者在结肠癌组织中表达呈正相关。结论OPN和COX-2在结肠癌的发生发展中起重要作用,联合检测可作为判断结肠癌恶性程度和预后的指标。第二章塞来昔布对结肠癌HT-29细胞生长及其骨桥蛋白表达的影响目的通过观察塞来昔布对结肠癌HT-29细胞的生长、凋亡及对骨桥蛋白、环氧化酶-2表达的影响,探讨塞来昔布抗肿瘤的作用机制。方法体外培养结肠癌HT-29细胞,以不同浓度塞来昔布干预人结肠癌细胞株]HT-29, MIT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞的凋亡,RT-PCR和免疫组化分析细胞中的OPNmRNA、COX-2mRNA及其蛋白表达变化。结果1.塞来昔布对HT-29细胞增殖有明显的抑制作用,并且抑制程度和药物作用时间与药物作用浓度之间存在依赖效应。2.塞来昔布能诱导HT-29细胞凋亡,凋亡率随药物浓度增加而逐渐增高。3. RT-RCR及免疫组化的结果显示,药物干预组和细胞对照组相比HT-29细胞的OPNmRNA、COX-2mRNA及其蛋白表达下降。结论塞来昔布可能通过抑制OPN的表达,抑制结肠癌HT-29细胞的增殖、诱导其凋亡,OPN和COX-2之间可能存在某种复杂的关联,具体的联系途径仍需进一步的探讨。