【摘 要】
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目的:肿瘤是全世界发病率和死亡率增长最快,对人类健康和生命威胁较大的疾病,从免疫学角度对其进行研究和治疗是一条很有希望的途径。而寻找和研究新的有效的肿瘤抗原是这一
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目的:肿瘤是全世界发病率和死亡率增长最快,对人类健康和生命威胁较大的疾病,从免疫学角度对其进行研究和治疗是一条很有希望的途径。而寻找和研究新的有效的肿瘤抗原是这一途径的核心问题。近年研究发现CT抗原呈高度的组织限制性表达、在肿瘤患者体内具有免疫原性、可以诱导体液免疫与细胞免疫等特性,为肿瘤免疫治疗提供了新的机遇。而NY-ESO-1是其中免疫原性最强的分子,本文以分子生物学实验和免疫学实验为基础,克隆肿瘤特异性抗原NY-ESO-1基因,构建表达载体并在大肠杆菌中高效表达NY-ESO-1全蛋白,制备多抗,并研究该分子在不同类型肿瘤组织中的表达情况,为深入探讨NY-ESO-1表达机理及其在肿瘤诊断、免疫治疗方面的应用奠定基础。 方法:用RT-PCR方法从A375细胞中获得人NY-ESO-1基因全长,构建重组表达质粒,用IPTG诱导表达NY-ESO-1蛋白,亲和层析进行纯化,用纯化的GST融合蛋白免疫动物,获得多克隆抗体。并通过NY-ESO-1及其他CT抗原在肿瘤组织中的表达谱初步观察NY-ESO-1与肿瘤发生发展的关系,分析CT抗原多价疫苗制备的意义。 结果:成功地克隆了NY-ESO-1基因,构建了重组表达质粒pGEX-4T-2/NY-ESO-1,成功优化GST-NY-ESO-1蛋白的原核表达条件,得到高效表达的NY-ESO-1蛋白,经SDS-PAGE分析可观察到一分子量与理论值相符的诱导表
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