目的：现代医学，细胞生物学及分子生物学的发展，使人们认识到免疫系统的紊乱不仅会产生多种疾病，而且与人体衰老及老年人的多发病如肿瘤，高血压、糖尿病甚至精神病的发生均有密切关系。艾滋病(AIDS)的危害，使人们对免疫缺损的严重后果有了更深刻的认识，因此寻找具有良好免疫调节作用的药物已成为当代新药的发展方向之一。对中草药免疫学研究已有数十年的历史，前阶段的研究多以中草药对免疫指标的增强或抑制为准绳，确定其对免疫功能的效应。近年来人们越来越认识到，探讨中草药在机体内发挥作用的部位及其对机体免疫网络影响的重要性。 蝎毒素的药用研究是由于全蝎作为传统的动物性中药材在我国已有上千年历史。在《本草纲目》、《本经逢源》、《开宝本草》及《医林篡要》等传统医学经典中记载，全蝎有活血化淤、攻毒散结、趋风止痛等功效。近年来对全蝎药理作用的研究已确认其药效成分集中在蝎毒中，并在其药理、药效学研究方面取得了很大进展。东亚钳蝎(Buthus martcnsii Karsch,BmK)是广泛分布在我国中西部地区的蝎种，其蝎尾提取液蝎毒是一种毒性仅次于蛇毒的生物毒素(Buthus martcnsiiKarsch Immunc Active，Bmk IA)，因具有复杂的成分及性质而产生多种生理、药理活性。蝎毒的抗肿瘤、抗风湿、抗癫痫以及对心血管病等方面的作用已被多位学者所证实，并有学者研究显示，蝎毒在做辅助治疗的同时具有增强机体免疫力、减少其它药物毒副作用之功效，却未见蝎毒作为免疫调节剂对机体发挥免疫调节作用的相关报道<[42,61]>。2005年国外报道在了解中毒病理机制时，发现蝎毒某组分(Titvus serrulatus scorpion vcnom,TSV)对小鼠巨噬细胞分泌(TNF-α、IL-1、IL-1β等)功能有调节作用，尤其组分Ⅱ(FⅡ)是巨噬细胞分泌TNF的强化因子；本课题组在前期的实验中也发现：蝎毒分离组分Ⅲ(Scorpion venom crude,SVCⅢ)微小剂量下对体外培养的人类急性T淋巴细胞白血病细胞系JurakatE6-1细胞的淋巴转化有促进作用(JurakatcE6-1可作为研究T淋巴细胞活化条件的模型)，且对荷瘤小鼠体内α-肿瘤坏死因子(TNF-α)的产生有促进作用。以上结果提示：BmKIA可能是一种生物应答调节剂，并通过调节机体的细胞免疫功能来发挥抑杀肿瘤细胞作用。有学者对其生物及生化学研究显示出蝎种属的遗传与毒素结构的同源性，而且蝎毒多肽的结构特征与一些细胞因子相像，大量的免疫细胞因子中含有类似的一级结构，(如趋化性细胞因子等)，BmK IA是否象某些细胞因子一样也对免疫细胞发挥激活或调节作用呢?Bmk IA是如何发挥免疫调节作用的，免疫作用靶点是什么，Bmk IA引起了什么样的免疫网络联系等问题还无相关的明确解释。 本研究通过小鼠体内实验，运用现代分子生物学实验技术，探讨BmK IA在活体内对四类主要免疫细胞(单核、NK、T、B细胞)的活化作用，从不同免疫细胞活化时相了解药物可能的作用靶细胞及活化动力学变化；进而探讨不同用药方式对BmK IA免疫活化作用的影响；为揭示Bmk IA在免疫网络中发挥调节作用机制建立理论基础。 方法：1.经小鼠尾静脉一次性注射有效剂量BmK IA后，在不同时段(2h、8h、12h、24h)取外周血，用特异性荧光抗体分别标记外周血单核、NK、T、B细胞，采用流式细胞术，检测四种主要免疫细胞共同活化标志CD69<+>的表达率，绘制CD69<+>表达的时效曲线，研究体内免疫细胞活化动力学变化，探明BmK IA作用的免疫细胞种类及其活化时段。2.采用尾静脉注射和腹腔注射两种用药方法，运用流式细胞术结合特异性免疫荧光标记法，观察有效浓度BmK IA对小鼠外周血4种主要免疫细胞的免疫活化作用，进一步了解不同用药方式对BmK IA发挥免疫调节作用的影响。 结果：1.静脉注射1/60半数致死量的BmK IA溶液，分别在不同时段流式细胞仪检测小鼠外周血5种免疫细胞CD69阳性率：各种细胞与其对照组比较均具显著性差异(P<0.05)，以CD8<+>T细胞最高，其次为NK细胞、B细胞和单核细胞，注射后2小时开始升高，8小时达高峰，12小时开始下降。对CD4<+>T细胞作用不明显。2.采用腹腔和静脉注射两种不同用药方式，流式细胞仪检测小鼠外周血免疫细胞CD69阳性率，通过分析得出：两种用药方式BmK IA对CD8<+>T细胞和B细胞均具活化作用，且效果相当；静脉注射BmK IA对NK细胞活化作用较腹腔注射起效块、活化率幅度高；腹腔注射BmK IA对单核细胞活化作用较静脉注射起效快、活化率幅度高。 结论：1.有效浓度BmK IA，对小鼠外周血5种免疫细胞均具有一定的活化作用，且具有一定时效性，作用强弱不同，以CD8<+>T细胞为最强，其次为NK细胞、B细胞和单核细胞，CD4<+>T细胞最弱，活化高峰在用药后8小时。2.腹腔注射，BmK IA对小鼠体内主要免疫细胞同样具有免疫活化作用；用药方式不同对单核细胞和NK细胞的活化作用影响较大，静脉用药时NK细胞活化时相早、峰值高，腹腔用药时单核细胞活化早、峰值高，而对T细胞和B细胞活化作用影响不明显，但腹腔用药时峰值较高、出现较晚。以上结果提示：用药方式不同影响可免疫细胞的活化，可能与药物的吸收及免疫细胞激活途径有关。