论文部分内容阅读
树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前所知的功能最强而且是唯一可以激活初始(naive)T细胞的抗原递呈细胞(antigen present cell，APC)，广泛参与多种免疫反应如T细胞的免疫激活、介导和维持免疫耐受、与B细胞一起参与免疫记忆等。由于DC的独特功能，使其成为一种天然佐剂，利用DC制备的肿瘤疫苗(简称瘤苗)在大量体外实验以及动物体内实验中取得了令人鼓舞的疗效。在治疗黑色素瘤的临床试验中，与肽瘤苗、肿瘤融解物瘤苗相比DC瘤苗疗效最好。DC瘤苗具有广阔的临床应用前景。 在DC瘤苗的临床试验中，尽管其最佳用量目前尚无定论，但一般每2～4周输注10~6～10~7个细胞，而且需要连续应用。因此，如何在短期内获得足够数量的DC是临床应用中首先要解决的问题。由于造血干细胞(hematopeitic stem cell，HSC)本身所具有的生物学特性，与单核细胞(monocyte，Mo)相比其更有利于大量获得DC。传统的从HSC诱导DC均是利用粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)+肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的基础上联合早期细胞因子一步诱导获得。由于这种方法在时间上一般不超过12天，因此所得DC数量仍然有限。如果先利用早期细胞因子对HSC进行扩增然后再进行诱导则可以大大地提高DC的产量。因此，在实验一中，我们利用本实验室已经建立的一个Fltk-3配体(Fltk-3Ligand，FL)+血小板生长因子(thrombopoietin，TPO)+干细胞因子(stem cell factor，SCF)+白细胞介素3(interleukin-3，IL-3)的高效脐带血(cord blood，CB)HSC的扩增体系，探索不同扩增时间以及诱导时间的最佳组合，初步构建了一个两步法大量诱导获得DC的体系。在这一体系中，在扩增10天之内，DC数量随着扩增时间的延长而增加，扩增时间超过10天并不能显著增加DC产量，诱导时间少于8d将降低所得DC的功能。因此，扩增10天+诱导8天是一个最经济高效的组合方案。 DC的成熟程度对其功能具有重要影响，在实验一中我们所获得的DC虽然具有正