探讨脂多糖致急性肺损伤时Tribbles同源蛋白3表达变化

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liunian2008
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目的探讨Tribbles同源蛋白3(TRB3)在脂多糖(LPS)致急性肺损伤时的变化及其与p38-MAPK信号通路的关系。方法体内实验:复制LPS致急性肺损伤(ALI)大鼠模型,分生理盐水对照组(5ml/kg)和5 mg/kg LPS刺激组,免疫组织化学法检测肺组织中TRB3蛋白表达,逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测肺组织TRB3 m RNA表达。体外实验:体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),随机分为LPS量效组(0、2、4、10μg/ml LPS分别孵育4 h)、LPS时效组(10μg/ml LPS分别孵育0、4、8、12 h)和p38抑制剂(SB203580)干预组:分为正常对照组,10μg/ml LPS组、10μmol/L SB203580组、10μmol/L SB203580+10μg/ml LPS组,免疫印迹法检测TRB3蛋白、p-p38和p38-MAPK表达。结果免疫组织化学法显示大鼠肺泡壁和腺上皮均表达TRB3;RT-PCR法检测大鼠肺组织和大鼠PMVEC均表达TRB3 m RNA;与生理盐水组比较,LPS致ALI大鼠肺组织TRB3 m RNA表达显著增加(3.675±0.423 vs 1.056±0.209,t=15.524,P<0.01);与未刺激组比较,LPS刺激的大鼠PMVEC中TRB3 m RNA表达增加(2.098±0.317 vs0.612±0.314,t=7.549,P<0.01);免疫印迹法发现PMVEC表达TRB3蛋白:表达量随LPS浓度(0、2、4、10μg/ml)增加逐渐升高,分别为0.169±0.089、0.198±0.071、0.338±0.089、0.494±0.118,组间比较,差异有统计学意义(F=12.619,P<0.001);时效组TRB3蛋白表达量于4 h达高峰(0.443±0.087),之后下降, 8 h(0.303±0.107),仍高于正常对照组(0.159±0.073),组间比较,差异有统计学意义(F=11.273,P<0.001)。干预组:与正常对照组比较,10μg/ml LPS诱导大鼠PMVEC的p-p38蛋白表达量增高(0.660±0.100 vs 0.227±0.085,t=49.121,P<0.001)以及TRB3蛋白表达增高(0.461±0.097 vs 0.178±0.084,t=15.113,P<0.001);10μmol/L SB203580+10μg/ml LPS联合刺激组与LPS单独刺激组比较,p-p38蛋白表达量下降(0.557±0.125 vs 0.660±0.100,t=7.040,P<0.05,TRB3表达量也下降(0.306±0.077 vs 0.461±0.097,t=11.900,P<0.001);SB203580单独作用对大鼠PMVEC表达p-p38及TRB3蛋白无影响(与正常对照组比较,P>0.05)。结论LPS致急性肺损伤时TRB3表达增加,TRB3表达受p38-MAPK信号通路调控。
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