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背景与目的:
观察补肾疏肝方含药血清对人肺腺癌A549细胞生长的影响及补肾疏肝方对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫及内分泌的影响并研究其中可能存在的机制。
方法:
补肾疏肝方含药血清对人肺腺癌A549细胞生长的影响实验。选取健康的SD大鼠30只,随机分为五组:模型组、DDP组、补肾疏肝方低剂量组、补肾疏肝方中剂量组、补肾疏肝方高剂量组,每组6只。模型组给予生理盐水4ml/天;DDP组给予0.5mg/mlDDP液2ml,分别于第1、3、5天腹腔注射;补肾疏肝方低剂量组给予中药4ml/天灌胃(1.75g/ml共计含生药7g);补肾疏肝方低剂量组给予中药4ml/天灌胃(3.5g/m1共计含生药14g);补肾疏肝方低剂量组给予中药4ml/天灌胃(5.25g/ml共计含生药21g)。共干预5天。第5天干预2小时后腹主动脉取血,制备大鼠含药血清,-20℃冰箱保存。临用时配制为含血清10％的培养液培养细胞,MTT法测OD值,观察补肾疏肝方含药血清对细胞生长的抑制作用。
补肾疏肝方对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫及内分泌的影响实验。植瘤5天后,于腋下可触及约5mm*5mm肿块。选取荷瘤成功的C57BL/6小鼠40只,随机分为四组:模型组、DDP(cisplatin)组、补肾疏肝方组、DDP+中药组。每组10只。模型组给予0.9%NaCl灌胃0.4ml/天,同时于第1、3、5天腹腔注射0.9%NaC10.5ml。DDP组小鼠分别在实验第1、3、5天给予腹腔注射0.5mlDDP(0.2mg/ml)溶液,并给予0.9%NaCl灌胃0.4ml/天。补肾疏肝方组给予中药灌胃0.4ml/天(1.75g/m1共计含生药0.7g),同时于第1、3、5天腹腔注射0.9%NaC10.5ml。DDP+中药组给予每日中药灌胃,同时分别于第1、3、5天腹腔注射DDP0.5ml。共干预14天。每日记录小鼠精神状态、活动状况、毛发饮食及大小便情况,每天称取小鼠体重,测肿瘤体积。于第15天摘眼球取血,剥取肿瘤称重,计算抑瘤率、肺转移抑制率等。采取酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测血清IL-2、IL-10、E2、T含量。
结果:
1、体外实验中,与模型组相比,中药低剂量组48h、72h,中剂量组、高剂量组、顺铂组均可以抑制肺腺癌A549细胞生长,差异明显(p＜0.01),并呈时间-剂量依赖性。高剂量组与顺铂组差异不明显(p＞0.05)。
2、体内实验中,与模型组相比,各用药组均能抑制肿瘤生长,差异明显(p＜0.01)。与中药组相比较,中西医结合组平均瘤重显著降低,有统计学意义(p＜0.05)。
3、与模型组相比,其余各组均能显著抑制肿瘤的自发性肺转移(p＜0.05或p＜0.01)。
4、实验结束后,与模型组相比,DDP组小鼠体重均明显减轻,差异显著(p＜0.05);中药组及DDP+中药组小鼠体重均明显增加,差异显著(p＜0.05)。与模型组相比,各用药组小鼠肿瘤体积明显较小(p＜0.05)。
5、与模型组相比,各组血清IL-2含量均明显增高,差异显著(p＜0.01);与DDP组相比,DDP+中药组明显增高(p＜0.01)。与模型组相比,各用药组IL-10显著降低(p＜0.01);与中药组和顺铂组相比,中西医结合组IL-10均显著降低(p＜0.01);与顺铂组相比,中药组IL-10降低有统计学意义(p＜0.01)。
6、与模型组相比,各用药组E2显著降低(p＜0.01);与顺铂组和中药组相比,中西医结合组E2表达降低有统计学意义(p＜0.01)。与模型组相比,各用药组T显著升高;与顺铂组和中药组相比,中西医结合组T表达升高有统计学意义(p＜0.01)。与模型组相比,各用药组E2/T显著降低(p＜0.01);与顺铂组和中药组相比,中西医结合组E2/T表达降低有统计学意义(p＜0.01)。
结论:
1、补肾疏肝方含药血清可以抑制肺腺癌A549细胞生长,并呈时间-剂量依赖关系。
2、补肾疏肝方可以显著抑制小鼠Lewis肺癌生长,并与顺铂联合有协同作用。
3、补肾疏肝方可以调节荷瘤小鼠体内免疫及内分泌平衡,这可能是本方抑制肿瘤生长的机制之一。
4、补肾疏肝方可以提高小鼠生活质量,减轻化疗引起的毒副作用。