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酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病,主要表现为肝细胞不同程度的损伤,按病程进展分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化,最终可导致肝细胞广泛坏死,发生肝功能衰竭。酒精性肝纤维化是长期酒精刺激下肝脏组织以细胞外基质（extracellular matrix,ECM）增生为特征的病程,是ALD进程的中心环节,有效治疗酒精性肝纤维化可以阻断或延缓慢性ALD向酒精性肝硬化发展,然而目前临床尚未有能有效防治酒精性肝纤维化的理想药物。咖啡因（caffeine）是日常饮料咖啡、茶叶中的主要成分。饮用含有caffeine的饮料已经遍及全球,在传统观念里,饮用太多含caffeine的饮料似乎对健康无益,但近年来多项研究报道饮用以caffeine为基础的饮料能够降低患肝脏疾病的概率,但其作用机理尚未完全阐明。那么caffeine的摄入是否也会影响到ALD进程的中心环节酒精性肝纤维化以及其可能的作用机制是什么?本实验在参考国内外相关文献的基础上,首先采用酒精浓度逐渐递增法,每日两次灌胃连续12w,成功建立了酒精性肝纤维化的大鼠模型,并在此基础上通过乙醛刺激大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）建立了酒精性肝纤维化的体外模型,观察低摄入量caffeine对大鼠酒精性肝纤维化的防治作用以及其对乙醛刺激的大鼠HSC-T6的增殖、凋亡、细胞周期的影响及部分作用机制。主要内容概括如下:1.Caffeine对大鼠酒精性肝纤维化的防治作用采用酒精浓度递增法每天早晚两次灌胃,连续12w制备大鼠酒精性肝纤维化模型,给药组同时灌服不同剂量caffeine（5,10,20mg/kg）。第8w和第12w末,用药组大鼠血清酶学指标丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、透明质酸（hyaluronic acid,HA）、层粘连蛋白（laminin,LN）、III型前胶原（Procollagen III,PIIINP）、IV型前胶原肽（Procollagen IV,CIV）较模型组显著降低（P<0.01）;HE染色和天狼猩红染色表明8w末模型组大鼠肝组织出现炎细胞浸润和大小不等的脂肪滴,部分肝小叶可见坏死,汇管区边缘有红色胶原纤维包绕,12w末模型组大鼠肝组织中坏死区内大量炎细胞浸润,汇管区有明显红色胶原纤维增生并延伸至肝小叶内,caffeine高剂量组炎性浸润程度较轻,结缔组织增生减少,纤维间隔变窄,肝组织结构趋于正常。免疫组化检测显示模型组大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth mucle actin,α-SMA）较正常组表达上调,caffeine用药组大鼠肝组织中α-SMA表达较模型组降低同时伴随着肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis–related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）的两种受体DR4（death receptor 4）、DR5（death receptor 5）表达上调。以上结果表明caffeine对大鼠酒精性肝纤维化有防治作用,其机制可能是caffeine能够上调DR4、DR5的表达而减少α-SMA的生成,从而缓解酒精性肝纤维化。2. Caffeine对乙醛刺激的大鼠HSC-T6增殖、凋亡的影响及部分作用机制采用200μmol·L-1的乙醛刺激caffeine预处理1h后的大鼠HSC-T6,分别于24h,48h,72h用四甲基偶氮唑蓝[3-（4,5-dimethylthiazol-2-thiazolyl）-2,5-,MTT]法检测HSC-T6增殖情况。结果显示,caffeine对乙醛刺激的HSC增殖具有抑制作用,且表现出一定的浓度和时间依赖性,24、48、72h的半效抑制浓度（50% inhibiting concentration,IC50）分别为21.404、3.332、1.784 mmol·L-1。流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测caffeine作用于乙醛刺激的HSC-T6 48h后的细胞凋亡及细胞周期变化情况,与模型组相比,凋亡率显著增高,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,G2/M期细胞减少。提取乙醛刺激的HSC-T6细胞总RNA,RT-PCR结果显示,与模型组相比,caffeine组α-SMA、I型前胶原（Procollagen I,PI）、III型前胶原（Procollagen III,PIIINP）的mRNA表达减少,TRAIL受体DR4、DR5的mRNA表达增加。以上结果表明caffeine能够抑制乙醛刺激的大鼠HSC-T6的增殖,其机制可能与上调HSC-T6中DR4、DR5的表达有关。该实验为caffeine应用于酒精性肝纤维化治疗提供了一定的体外实验基础,为评价、筛选有效治疗酒精性肝纤维化的药物提供了新思路。