农杆菌介导法将Bt毒蛋白基因导入水稻的研究

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该文以当前培育超级杂交稻正在广泛使用的两个优势亲本培矮64S和9311作为主要研究对象,对影响其成熟胚来源的愈伤组织诱导、分化和植株再生条件进行了优化;对影响农杆菌转化上述籼稻的条件进行了探索和优化;建立了高频的离体再生系统和比较高效的遗传转化方法.同时对转基因植株进行了分子检测和抗虫性分析.1.培短64S和9311离体再生系统的优化.研究了影响两种籼稻愈伤组织诱导、继代和分化成苗的相关因素,结果表明:种子本身的生理状态是影响愈伤组织诱导频率的主要因素之一;将N6培养基的大量元素与MS微量元素组合,同时提高VB1和肌醇的含量可显著提高愈伤组织的诱导和培养效果;在合适的2,4-D浓度下,添加其他外源激素不能显著提高愈伤组织的诱导率,但可改善愈伤组织的胚性生长状态;交替使用不同的培养基成分和激素浓度配比可使长期继代培养物保持胚性状态,延长继代培养的时间;预分化和干燥处理使植株再生的频率和质量大大提高.2.采用农杆菌介导法将Bt毒蛋自基因导人水稻.同样以上述两种籼稻为主要研究材料,比较了分别以预培养的幼胚和幼穗、幼胚、成熟胚来源的愈伤组织作为转化受体的愈伤组织转化频率,结果表明预培养4~6天的幼胚最适宜作为农杆菌介导转化的受体;其次是来源于幼胚和成熟胚的生长状态良好的胚性愈伤组织.
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