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目的：炎症性肺病（inflammatory lung disease, ILD）是感染、中毒、免疫等各种肺内外因素引起的肺部炎症反应。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是其重要致病因素。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage, AM）作为肺部第一道防线，在启动和维持炎症反应方面发挥重要作用。LPS作用于AM表面受体，通过细胞内信号级联传递，可释放促炎因子如肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α和抗炎因子如白介素（Interleukin, IL）-10。P38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase, MAPK）是参与细胞内信号传导的重要激酶，介导炎症反应，同时信号转导转录激活子-3（signal transducers and activators of transcription-3,STAT3）在LPS导致的炎症瀑布反应中发挥作用[1]。p38MAPK抑制剂SB203580可抑制LPS所致肺部炎症反应。我们假设p38MAPK和STAT3信号通路间存在关联。本实验以小鼠AM为研究对象，观察SB203580对LPS诱导的MH-S细胞上清液IL-10及STAT3活化的影响，探讨p38MAPK与STAT3间关系，为临床治疗ILD提供新的思路。方法：（1） ELISA法测定细胞上清液IL-10浓度：复苏并传代培养MH-S细胞，调节细胞浓度为5×106/ml于24孔板中过夜，随机分组刺激后收集细胞上清液，用ELISA试剂盒检测IL-10浓度。分组：①对照组：加入与实验组等体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组：终浓度100ng/ml LPS;③LPS+SB5组：加入终浓度5μΜ SB203580，20min后加入终浓度100ng/ml LPS;④LPS+SB10组：加入终浓度10μΜSB203580,20min后加入终浓度100ng/ml LPS;⑤LPS+SB15组：加入终浓度15μΜ SB203580，20min后加入终浓度100ng/ml LPS。各组分别刺激90min、2h、4h、6h、12h取细胞上清液，冻存于-80℃，待ELISA检测IL-10浓度。（2）免疫细胞化学法测定STAT3和磷酸化STAT3的表达变化。调整细胞浓度106/ml，于24孔板爬片过夜，按以下分组分别测定STAT3和磷酸化STAT3的表达。分组：①对照组：加入与实验组等体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS15min组：终浓度100ng/ml LPS;③LPS15min+SB10组：加入终浓度10μΜ SB203580，20min后加入终浓度100ng/ml LPS。结果：（1）ELISA测定细胞上清液中IL-10含量的变化：LPS刺激MH-S细胞后，细胞上清液中IL-10含量增加，LPS刺激90min，IL-10含量开始升高，6h达最高值，12h含量降低。经单因素方差分析，对照组、LPS组与SB+LPS组，三组间IL-10表达水平有显著性差异（P<0.05）。SB203580（5μΜ、10μΜ和15μΜ）预处理显著抑制LPS诱导的IL-10含量增加，SB203580组无显著量效关系（P＞0.05），IL-10含量仍高于对照组。（2）免疫细胞化学测定STAT3和磷酸化STAT3的表达变化。①STAT3的表达变化：对照组及试验组均细胞质黄染，经单因素方差分析，各组间STAT3表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;②磷酸化STAT3的表达变化：对照组仅见微弱黄染，LPS15min组细胞核黄染增强，LPS15min+SB10组细胞核黄染变淡。经单因素方差分析，两个实验组与对照组比较，磷酸化STAT3表达均显著增高（P<0.05）；与LPS15min组比较，LPS15min+SB10组磷酸化STAT表达显著降低（P<0.05），但与对照组比较LPS15min+SB10组磷酸化STAT3表达仍显著增高（P<0.05）。数据以均数±标准差（x±s）表示。各组用单因素方差分析（One wayANOVA）进行比较。如有显著性用Student-Newman-Keuls（SNK-q）检验，P<0.05表示有统计学意义。结论：1LPS刺激MH-S细胞引起细胞上清中IL-10分泌增加；用p38MAPK抑制剂SB203580干预后，IL-10的分泌减少，仍高于对照组，提示SB203580可能抑制IL-10分泌。随着SB203580剂量增加，IL-10含量差异不显著，提示SB203580剂量增加可能对抗炎细胞因子IL-10无显著性影响。2非活性STAT3存在于细胞浆。LPS刺激MH-S细胞后，STAT3被激活变为有活性的p-STAT3，部分从细胞浆进入细胞核。应用SB203580干预后，细胞核黄染减弱，说明SB203580可能通过p38MAPK减少p-STAT3的表达，提示p38MAPK和STAT3间可能存在关联。3上述结果提示SB203580可能通过p38MAPK抑制STAT3活化，从而抑制IL-10分泌。