目的:肾间质纤维化是各种原因引起的慢性肾脏病变最后的共同结局,最终导致终末期肾功能衰竭。尽管肾脏纤维化发生的机制迄今仍未阐明,大量的临床和实验研究证实肾小管间质组织的改变较肾小球的改变更能预示进展性肾脏疾病的预后,造成这一过程的直接原因是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度增加及降解减少。研究表明,血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,TSP-1)在肾间质血管生成过程中具有重要作用,TSP-1是内源性血管生成抑制物,具有诱导内皮细胞凋亡,抑制新生血管生成,活化TGF-β1功能。TSP-1可抑制内皮细胞增殖,诱导内皮细胞凋亡和抑制血管新生并通过抑制肾小管周围毛细血管生成,促进肾间致纤维化。近年来大量的研究表明,肾内肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)在肾脏纤维化发生中起着十分关键的作用,过去一直认为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是这一系统中造成肾损害的主要物质。近年的研究结果表明,在进展性肾脏疾病中,醛固酮(aldosterone, ALD)亦是重要的致病因素之一,ALD可通过血流动力学和直接作用于肾脏而发挥作用,其具有不完全依赖AngⅡ的独立作用,特别是在致器官纤维化方面,但其作用机制目前尚未完全明了。近年的研究显示,ALD不仅可以导致钠水潴留,而且可以促进组织胶原沉积、纤维化,如肾脏、心脏、血管等器官纤维化。肾脏本身产生的ALD在局部同样促进组织胶原的沉积,上调一些致纤维化因子;另外,调节血管紧张度,影响血压;通过调节钠-钾-ATP酶合成和功能,影响细胞功能。ALD在进展性肾损害中发挥重要作用,血清ALD水平的升高,促进了肾小管基膜增厚、小管上皮细胞萎缩、间质炎症细胞浸润、间质小动脉壁增厚,可刺激肾间质Ⅰ型胶原合成和纤维连接蛋白(fibronetion, FN)分泌,上调TGF-β1,而TGF-β1可诱导肾间质成纤维细胞、肾小管上皮细胞发生表型转化,活化为MFB,参与肾间质中MFB的积聚,增加ECM堆积从而加速小管间质纤维化。有文献报道在正常人近端肾小管上皮细胞中无TSP-1的表达,在刺激诱导下其表达合成增多。但ALD对人近端肾小管上皮细胞TSP-1的表达有何影响,是否能诱导其表达并促进细胞增殖,进而促进肾小管间质纤维化的进展,目前仅有极少量报道。因此,本课题利用体外培养的人近端肾小管上皮细胞,研究ALD对肾小管上皮细胞TSP-1的表达及增殖的影响,以探讨ALD在肾间质纤维化中的作用及可能的发病机制。方法: 1人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubular cells HKCs)的培养: HKCs购自中国协和医科大学细胞中心,使用DMEM/F12培养液(含10%胎牛血清、100 U/L青霉素和100 mg/L链霉素),于37℃、5% CO2环境中培养。实验分两组:空白对照组及不同浓度ALD组。观察不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L)ALD及不同时间(10-6 mol/L ALD组作用于人近端肾小管上皮细胞24 h、48 h及72 h)对人近端肾小管上皮细胞TSP-1 mRNA的表达及增殖的影响。2应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察ALD对人近端肾小管上皮细胞TSP-1 mRNA表达的影响。3四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度的ALD对人近端肾小管上皮细胞增殖的影响。4本实验计量资料用±s表示,使用SPSS 13.0统计软件进行统计描述。结果: 1 RT-PCR结果显示正常培养条件下人近端肾小管上皮细胞不表达TSP-1;ALD能诱导人近端肾小管上皮细胞TSP-1的表达(与对照组比较,P<0.01),并随着浓度的升高及作用时间的延长,TSP-1表达逐渐增加;呈现出剂量和时间依赖性的趋势。2 MTT结果均显示ALD促进人近端肾小管上皮细胞的增殖(与对照组比较,P<0.01),随着ALD浓度的升高及作用时间的延长,表现出剂量和时间依赖性的趋势。结论: 1体外培养的人近端肾小管上皮细胞正常培养条件下不表达TSP-1。2 ALD可以诱导人近端肾小管上皮细胞TSP-1的表达,并呈现出剂量和时间依赖性的特点。3 ALD可以促进人近端肾小管上皮细胞增殖,呈剂量和时间依赖性的特点。4 ALD的肾损伤作用部分可能是通过诱导TSP-1的分泌,促进肾小管上皮细胞增殖等作用,参与间质纤维化的进展,在肾间质纤维化中起着十分重要的作用。阻断ALD可能抑制肾纤维化的进程。