论文部分内容阅读
本论文针对分离鉴定获得的鸭肫抗氧化肽(HKIPVK),首先对26个已知抗氧化活性肽进行QSAR建模分析,进一步分析肽HKIPVK结构构效关系,通过定量构效关系建模对鸭肫肽(HKIPVK)的抗氧化活性进行验证;其次通过对肽HKIPVK进行合成,并研究其功能特性和抗氧化稳定性,最后初步探讨鸭肫抗氧化肽(HKIPVK)对肿瘤细胞生长的抑制作用,旨在为其在食品、药品等领域中开发出具有抗氧化、抗肿瘤特性的产品提供一定的理论支撑。本论文研究目的在于挖掘鸭副产品在市场上的潜在利用价值,增加鸭副产品利用途径,以期为畜禽养殖业的经济发展及人们的健康做出贡献。本论文试验内容做出如下归纳: (1)对26个已知抗氧化活性肽进行QSAR建模研究。BPNN模型的QSAR研究结果在三种建模中是最好的,具有较强的预测能力,因此该建模方法对抗氧化肽活性的预测是可靠的,使用BPNN模型对鸭肫抗氧化肽(HKIPVK)抗氧化活性进行预测,其ORAC预测值为13.8282,此结果进一步验证肽HKIPVK具有抗氧化活性。 (2)鸭肫抗氧化肽(HKIPVK)的稳定性研究。肽HKIPVK在较酸性和较碱性条件下都表现出较好的溶解性;其乳化性和乳化稳定性随着pH的增加呈现出先下降后上升的趋势,在pH=6时最差;起泡性随着pH的增加先降低后上升,泡沫稳定性随着pH的增加先升高后降低。鸭肫抗氧化肽的耐热性较好;在pH=8时,DPPH?自由基清除率此时为最高75.46%,但在其pH范围内,清除率保持在73%-75%,而总抗氧化能力随着pH的升高呈现出下降趋势;H2O2添加量对鸭肫抗氧化肽清除DPPH?自由基能力变化不明显,但在整体上能够降低其总抗氧化能力;当鸭肫抗氧化肽的质量浓度为50 mg/mL时,DPPH?自由基清除率最高为60.55%,总抗氧化能力最高为14.18;不同金属离子对鸭肫抗氧化肽活性的影响不同,在Fe3+、Fe2+、Cu2+中具有良好的稳定性。 (3)鸭肫抗氧化肽(HKIPVK)对肿瘤细胞生长的抑制作用研究。MTT结果显示:鸭肫抗氧化肽对PC-3、MDA-MB231、PC-12细胞表现出良好的生长抑制活性,其中,对PC-3细胞的生长抑制作用最好,其IC50值大约为50 mg/mL,PC-3细胞最佳培养时间和鸭肫抗氧化肽的最佳浓度分别为48 h和25 mg/mL。流式细胞术结果可知,鸭肫抗氧化肽主要引起PC-3细胞的S期发生阻滞,从对照组26.46%分别增加到41.49%、36.21%和29.69%(P<0.05),说明鸭肫抗氧化肽通过诱导细胞周期阻滞来抑制PC-3细胞增殖;不同浓度鸭肫抗氧化肽对PC-3细胞的凋亡率(早期凋亡和晚期凋亡)分别为34.3%、21.4%和20.6%,与空白对照组(11.3%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05),说明鸭肫抗氧化肽对PC-3细胞凋亡的促进作用是发挥其抑制肿瘤细胞增殖的机制之一。