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全反式维甲酸(All-trans retinoic acid, atRA)是维生素A(Vitamin A)的代谢产物,是脊椎动物体内重要的生物活性物质,通过与其核内受体结合调节基因的转录参与细胞生长、细胞分化、形态发生、免疫功能调节等生理过程。在抗感染、抑制肿瘤细胞生长及增殖、诱导(肿瘤)细胞分化和凋亡等方面,维甲酸类化合物也具有广泛的生物学作用。临床上,维甲酸类化合物已广泛应用于预防及治疗一些恶性肿瘤,包括乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、早幼粒细胞白血病等。体内维甲酸类化合物的平衡受饮食及其相关代谢酶等因素的影响,其相关酶类调控代谢的机制至今仍未完全阐明。辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NADP(H) dependent retinol dehydrogenase/reductase, NRDR)是从兔肝中发现并纯化的一种酶,具有很强的视黄醇氧化与视黄醛还原活性。视黄醇(Ratinol)在体内经两步代谢生成维甲酸,中间代谢产物为视黄醛(Ratinal)。Ratinol生成Ratinal的反应是体内维甲酸合成的限速步骤,因此NRDR在调节生物体内维甲酸的稳态过程中起着重要作用。鉴于NRDR分子功能的多样性及重要性,本课题以重组的兔NRDR蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,制备出高效价、高特异性的单克隆抗体(mAb),为NRDR的生物学功能的进一步研究奠定了基础。我们以纯化的重组兔NRDR蛋白为免疫原,采用皮下多点注射法免疫Balb/c小鼠。将成功免疫小鼠的脾脏制成脾细胞悬液,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,通过间接ELISA法筛选阳性细胞,采用传统的有限稀释法进行亚克隆培养,最终得到可稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,并通过诱生腹水法制备获得大量单克隆抗体。间接ELISA法检测mAb的效价并比较几株单抗的相对亲和力大小,Ig亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,Western blot鉴定mAb的特异性。最终,我们通过杂交瘤技术获得3株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞NR1、NR2和NR5,其抗体亚类均为IgG1,细胞培养上清效价依次为1:20、1:40和1:20,同时这3株杂交瘤制得的腹水效价分别为1:106、1:107和1:106,相对亲和力大小依次为NR2>NR1>NR5。Western bolt检测证明我们获得的3株杂交瘤细胞所分泌的mAb特异性良好。