【摘 要】
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目的:研究抗真菌肽MAF-1A体外抗近平滑念珠菌的活性特点、对近平滑念珠菌转录水平的影响情况以及近平滑念珠菌生物膜的抗性特点,为抗真菌肽MAF-1A的抗菌作用机制研究提供方向和奠定研究基础,为筛选高效、安全的新型抗真菌肽类药物提供理论基础和科学依据。方法:1.通过FMOC固相合成获得抗真菌肽MAF-1A,通过微量液体-菌落记数法联用检测MAF-1A体外抗近平滑念珠菌活性。2.采用液体微量稀释法和平
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目的:研究抗真菌肽MAF-1A体外抗近平滑念珠菌的活性特点、对近平滑念珠菌转录水平的影响情况以及近平滑念珠菌生物膜的抗性特点,为抗真菌肽MAF-1A的抗菌作用机制研究提供方向和奠定研究基础,为筛选高效、安全的新型抗真菌肽类药物提供理论基础和科学依据。方法:1.通过FMOC固相合成获得抗真菌肽MAF-1A,通过微量液体-菌落记数法联用检测MAF-1A体外抗近平滑念珠菌活性。2.采用液体微量稀释法和平板菌落计数法绘制时间-杀菌曲线。3.采用RNA-seq测序分析技术研究在抗真菌肽MAF-1A作用下近平滑念珠菌的转录反应,为MAF-1A的抗菌作用机制研究提供方向,丰富近平滑念珠菌转录组研究数据。4.采用体外生物膜造模,吸光度检测,荧光标记等技术观察MAF-1A对近平滑念珠菌生物膜形成、细胞活性的影响,为抗生物膜感染药物的研发提供资源。结果:1.MAF-1A在不同稀释浓度SDB培养基中对近平滑念珠菌的抗菌活性不同,随着SDB稀释倍数的增加,多肽的抗菌活性增强。2.MAF-1A对近平滑念珠菌显示出明显的抗菌活性,在1/4SDB培养基条件下,MAF-1A的MIC为0.3mg/m L、MFC为0.5mg/m L。时间-杀菌曲线显示MAF-1A作用于近平滑念珠菌0h至8h逐渐发挥抗菌作用,呈现先杀菌后抑菌效应。3.采用RNA-seq技术对抗真菌肽MAF-1A作用下的近平滑念珠菌进行转录组学分析,结果显示,在作用早期(6h),共检测到差异上调表达基因1122个,下调表达基因1065个。晚期(18h)影响上调表达基因101个,下调表达151个。这些差异基因中,编码麦角甾醇代谢相关的基因显著下调,而与氧化磷酸化反应相关的基因显著上调。KEGG富集分析显示,MAF-1A引起的差异表达基因主要涉及氨基酸合成与代谢、氧化磷酸化、甾醇合成,细胞凋亡等过程。4.MAF-1A可抑制近平滑念珠菌生物膜的形成,该多肽可结合并聚集于近平滑念珠菌生物膜内,并使膜内细胞活性显著降低。结论:1.MAF-1A具有抗近平滑念珠菌活性,且其抗菌活性受到SDB培养基的影响。2.转录组研究结果表明,MAF-1A在近平滑念珠菌中可能存在多个作用靶点。其可能通过影响细胞的多个环节的正常功能而抑制近平滑念珠菌的生长。MAF-1A可能通过破坏近平滑念珠菌的细胞膜,影响胞内核糖体、线粒体等功能的正常行使,发挥抗真菌活性。3.MAF-1A对近平滑念珠菌生物膜有明显的抑制作用,在抗生物膜感染药物研发中具有重要的研究意义。
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