【摘 要】
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在植物基因工程研究中,载体的构建与转化都需要用到选择标记基因,目前最常用的选择标记基因有新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ),潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)和草甘膦抗性基因(bar)
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在植物基因工程研究中,载体的构建与转化都需要用到选择标记基因,目前最常用的选择标记基因有新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ),潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)和草甘膦抗性基因(bar)等。由于公众顾虑这些抗性基因的使用可能会对生态环境和人们的健康产生威胁,许多研究都着眼于生物安全型标记基因的发掘与利用。葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖(2-DOG)本身对植物没有毒害作用,在植物细胞内可以转化为2-DOG-6-P(2-脱氧葡萄糖-6-磷酸)。2-DOG-6-P在糖酵解过程中与葡萄糖-6-磷酸竞争从而抑制植物细胞的生长。来自酿酒酵母的2-脱氧葡萄糖磷酸酶基因(DOG-l)编码2-脱氧葡萄糖磷酸酶(Randez-Giletal.1995),其可以将2-DOG-6-P去磷酸化从而解除糖酵解的抑制作用。因此以DOG-1为标记基因,以2-DOG为筛选剂的筛选方法为植物遗传转化提供了新的思路。为了评价2-DOG筛选剂在小麦遗传转化中的利用价值,本研究用含不同浓度2-DOG的培养基对小麦愈伤组织进行了筛选,试验重复了两次。结果显示2-DOG浓度高于800mg/L时,愈伤组织的生长受到极大的抑制。为了验证DOG-1作为筛选标记的效果,本研究从酿酒酵母中克隆了DOG-1,并构建遗传转化载体pUCBS-D6OG,并将其用于小麦幼胚愈伤组织的转化。在含800 mg/L2-DOG的筛选培养基上筛选3周后,转化子与非转化子生长状况差别明显。这一结果表明DOG-1/2-DOG的筛选方法可以运用于小麦遗传转化。
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