清热止血方、雷公藤多苷通过干预肾小球系膜细胞、足细胞轴中 TNF-α、podocalyxin治疗HSPN蛋白尿体外研究

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:feiyelsh
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  【目的】观察各组药物对紫癜性肾炎系膜细胞及足细胞损伤模型podocalyxin、TNF-α 表达和分泌的影响,进而了解清热止血方、雷公藤多苷在 HSPN 治疗中快速降蛋白尿的疗效机制。   【方法】通过亲和层析柱和分子筛法纯化血尿伴蛋白尿型 HSPN 患儿和健康对照者血清 m IgAl,将其热聚合后,作用于体外培养系膜细胞,观察细胞形态变化和增殖情况;检测 TNF-α 分泌情况。‚将 aIgAl 和其与系膜细胞共培养液上清分别作用于体外培养条件永生化足细胞,观察细胞形态变化;检测 TNF-α 分泌情况;检测足细胞结构分子 podocalyxin蛋白和核酸表达量的变化及蛋白表达分布情况。ƒ将制备好的清热止血方、雷公藤多苷片( GTW)、GTW+清热止血方、强的松+肝素各组含药SD 大鼠血清干预 HSPN 系膜细胞和足细胞损伤模型,观察细胞形态变化和增殖情况;检测 TNF-α 分泌情况和足细胞 podocalyxin 蛋白和核酸表达量和分布变化情况。④所得结果均用均数±标准差(x±s) 表示,所有数据应用 SPSS18.0 软件进行统计学处理,组间差异性比较采用单因素方差分析,两组间比较用 t 检验, P<0.05 有统计学意义。   【结果】HSPN 患者 IgA1 刺激系膜细胞 48h 后,各浓度梯度与对照组增殖情况比较, 0.25mg/ml 起效浓度, 1mg/ml 浓度时差异最明显( P<0.01);‚药物干预细胞损伤模型:在干预系膜细胞损伤模型增殖方面,清热止血方+GTW 抑制系膜细胞增殖明显, 48 小时观察与对照组比较具有统计学意义( P<0.05) ,优于其他各组;干预系膜细胞损伤模型TNF-α 分泌方面,各组含药血清均有统计学差异( P<0.05),其中又以清热止血方+GTW 组干预效果最为显著。ƒ药物干预足细胞损伤模型(上清组) TNF-α 分泌方面,各组含药血清均有明显抑制效果,而观察药物干预足细胞损伤模型( IgA1 组) TNF-α 分泌情况,发现含药血清各组均能够有效抑 TNF-α 分泌,通过干预效果两两组间对比发现,清热止血方+GTW、GTW 和西药组干预效果相当( P>0.05);④通过 RT-PCR 检测足细胞损伤模型 podocalyxin 核酸表达,我们发现无论是 IgA1 组还是上清组,各组含药血清刺激 48h 后与对照组比较均具有统计学意义,而 IgA1 组以清热止血方+GTW 含药血清干预最为明显,上清组强的松+肝素组、GTW 组、清热止血方+GTW 组上调 podocalyxin 蛋白核酸表达效果明显,组间两两比较不具有统计学差异。   【结论】患者 IgA1 在刺激系膜细胞增殖方面作用明显,且均具有一定浓度依赖性;来源于患者的 aIgA1 刺激系膜细胞分泌 TNF-α 效果更为显著;‚清热止血方+GTW 能够有效干预系膜细胞增殖及 TNF-α 分泌,其对足细胞损伤模型 TNF-α 分泌的干预效果与强的松+肝素和 GTW 效果相当;ƒ清热止血方+GTW 能够通过直接足细胞保护和抑制 TNF-α 分泌途径上调足细胞 podocalyxin mRNA 表达
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