论文部分内容阅读
鲫鱼PKR-like(PKZ)蛋白的N-端由2个Z-DNA结合域(za1和Za2)组成，属于Z-DNA结合蛋白家族之一。为更好理解鱼类PKZ的功能，本文进行了以下3个方面的工作。
1、采用RT-PCR对草鱼在28℃水温下各组织中PKZ的表达差异性进行分析。发现水温在28℃时，该基因在各组织中都有微量的表达。当将水温迅速升温至34℃2h后，PKZ在各组织中表达都有所增强，其中以肾脏和脾脏的最为强烈。另一方面，PolvI:C诱导草鱼2天后，该基因在各个所检组织中的表达量都有所提升，也在肾脏和脾脏表达最为强烈。
2、克隆了并表达了鲫鱼PKZ的C端。C端结构域长度约为1kb，并将其连接到表达载体Pet32a，转化至表达菌BL21PlysS，IPTG诱导表达，His标签纯化，得到了一个约为53kD左右的蛋白。PKZC端的表达和纯化为今后进一步对PKZ功能的研究提供了保证。
3、在体外表达并纯化3种Za表达多肽(Pza1、Pza2、PZalza2)的基础上。用AFM观察分析Pza与pMD18-T/d(Gc)13重组质粒的相互作用。结果显示：只有Pza1Za2与d(GC)13重组质粒有明显的结合，而PZa1、Pza2则不与它们结合。这与实验室先前用凝胶阻滞获得的实验结果一致。而且，PZa也对不含有d(GC)13序列的pMD18-T质粒没有结合能力。