定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数,以及易于与产物和底物分离等优点而被广泛深入的研究.但目前常用的固定化方法在制备固定化酶时酶活损失较大,且载体常常不可重复使用或载体的再生操作复杂,限制了固定化酶的产业化应用.该文针对目前固定化酶方法的不足之处提出了相应对策并对新的酶固定化方法和载体进行了探索.该文选用木瓜蛋白酶作为固定化对象,木瓜蛋白酶是一种来源广泛的巯醇类植物蛋白酶,在食品、轻纺、医学等领域有着广泛的应用,木瓜蛋白酶在酶动力学和结构学上都已得到了深入的研究,因此很适合作为评测酶固定化方法效率的模式酶.采用正硅酸乙酯与N-(β-氨乙基)-氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步水解的方法,一步法制备了氨基化的二氧化硅颗粒,这种颗粒大小均匀,氨基含量和颗粒大小可控,氨基含量高达5.6mmol/g.此颗粒经戊二醛处理后,采用共价法固定木瓜蛋白酶,固定化最适pH6.5,最佳给酶量为15mg/g载体,固定化酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为6.5,固定化酶热稳定性,pH耐受性,贮存稳定性都明显高于游离酶,表明此颗粒可作为一种优良的酶固定化载体.该文采用了反相悬浮包埋合成磁性琼脂糖微球,采用悬浮聚合法合成苯乙烯-甲基丙烯酸羟乙酯,经环氧氯丙烷和亚氨基二乙酸处理使微球带上螯合基团,经吸附铜离子或镍离子后用于固定化木瓜蛋白酶.实验的初步结果显示,磁性琼脂糖微球可用于固定化木瓜蛋白酶,并且经洗脱液洗脱,酶可以从载体上洗脱下来,载体经再吸附金属离子后可以再生,并可用于再次固定化木瓜蛋白酶,载体重复使用3次后酶活仍达首次时的90%.初步实验结果表离子螯合载体可用于固定化木瓜蛋白酶,并作为可再生载体经多次使用.