规模化羊场肺炎支原体流行病学调查及分离鉴定

来源 :塔里木大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangmu2003
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羊支原体肺炎,是一种高度接触性传染病,主要由支原体引起,临床表现为发烧、浆液性和纤维素性胸膜肺炎,具有较高的发病率和死亡率,目前已成为严重威胁我国养羊业发展的重要病原之一。为了了解新疆南疆地区支原体肺炎的感染情况,在5个羊场开展了绵羊支原体肺炎、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体肺炎进行了血清抗体检测,对绵羊肺炎支原体做了PCR检测和分离鉴定。主要研究内容和结果如下:1、5个规模化羊场3种支原体肺炎的血清流行病学调查采集329份血样进行绵羊支原体肺炎、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体肺炎的抗体检测,了解南疆地区5个规模化羊场支原体流行情况。结果发现,绵羊支原体肺炎的阳性率为14%-73.8%之间,羊场D的阳性率最低为14%;羊场A的阳性率最高为73.8%。丝状支原体山羊亚种的阳性率为8.1%-16.6%,羊场E的阳性率最低为8.1%;羊场D的阳性率最高位16.6%。山羊支原体肺炎的阳性率为8.1%-46%,羊场E的阳性率最低为8.1%;羊场D的阳性率最高阳性率为46%。结果显示,羊场的支原体肺炎存在多种支原体。2、3个规模化羊场绵羊肺炎支原体的分子流行病学调查根据血清抗体检测的结果,挑选绵羊支原体肺炎阳性率较高的3个规模化羊场采集鼻拭子119份、病羊肺脏组织6份,进行分子流行病学调查。采用PCR技术对采集的样品进行初步的鉴定,选用部分代表株进行16S r RNA基因进行序列测定,研究表明,3个规模化羊场的阳性率分别为,15%、16%、2%、4%。其中羊场A的阳性率最高。3、绵羊肺炎支原体的分离鉴定利用PPLO液体和固体培养基对鼻拭子、肺脏组织的阳性样品进行分离培养,使用光学显微镜观察其菌落形态,分离株菌落瑞氏染色后,呈现球形,菌落中心呈深蓝色。进一步采用PCR方法从分子水平确定其种属。参照MO特异性引物进行PCR鉴定并测序,遗传进化分析显示,分离株(BSZ)与注册号为NR025989.1亲缘关系较近(亲缘性关系图4-5)。运用MA GE 7.0软件的邻接法构建基于16S r RNA基因的系统发育树,分析显示,BSZ与注册号为N R025989.1在同一分支上(系统进化树图4-6)。2株培养物均扩增出大小为418bp、1021bp的目的片段,结果表明2株分离株均为绵羊肺炎支原体。
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