论文部分内容阅读
PRGL(Proline-Rich GASA-like)基因是本实验室在研究非洲菊(Gerberahybrida)花瓣发育过程中克隆到的。根据其结构分析,推测它可能与赤霉素(Gibberellin A,GA)诱导的细胞生长有关。为了从基因沉默的角度研究PRGL基因的功能,本论文一方面研究多效唑(Paclobutrazo,PAC)和赤霉酸(Gibberellic acid,GA3)对非洲菊试管苗生长的影响,为反义PRGL转基因非洲菊获得后的表型分析奠定基础;另一方面构建反义PRGL基因表达载体,并分别以试管苗的单芽和叶柄为外植体进行农杆菌介导的转化非洲菊。
获得主要结果如下:
1.研究了PAC和GA3对非洲菊试管苗生长的影响。100μmol/L PAC完全抑制了生根并使芽基部出现腐烂;0.1~10μmol/L PAC使新生叶的叶柄变短、根变粗、根的平均数目和平均总鲜重显著增加。而0.5~50μmol/L GA3则促进新生叶的叶柄伸长、使根变细、根的平均数目和平均总鲜重显著减少。0.1~10μmol/L PAC和0.5~50μmol/L GA3均使新生叶的平均长和平均宽减小、平均总鲜重降低和新生根变短。试管苗在1μmol/L PAC的生根培养上分别培养1、4和7d后,在含10μmol/L GA3的生根培养基上分别恢复培养29、26和23 d,PAC对试管苗生长的抑制作用均出现了不同程度的恢复,其中对叶柄伸长的恢复最明显。
2.构建了反义PRGL基因表达载体,并将它成功转入根癌农杆菌LBA4404中。
3.优化了本实验室建立的非洲菊单芽遗传转化体系,并在此基础上初步建立以叶柄为外植体的遗传转化体系。Hyg对叶柄诱导芽、单芽诱导根和单芽诱导芽均有强烈的抑制作用,选择浓度分别为2、3和6mg/L。经Hyg从低到高浓度反复筛选和生根筛选后共获得5株生根的抗性植株,PCR检测均为阳性,初步证明PRGL己整合到非洲菊基因组DNA中。其中来自单芽转化体系的为3株,叶柄转化体系的为2株。单芽与叶柄转化体系的平均转化效率分别为0.35%和1.16%。