论文部分内容阅读
GDF9属于TGF-β超家族成员,是由卵母细胞分泌的一种生长分化因子,以旁分泌的形式调控卵泡细胞的生长和分化,并对卵巢颗粒细胞、膜细胞的生长和孕酮生成起重要作用。同TGF-β超家族其他成员一样,GDF9也是通过单跨膜的与Ser/Thr激酶偶联的受体介导信号转导,最终信号入核调控卵泡细胞基因表达。因此,GDF9被视为影响哺乳动物繁殖性能的主要候选基因。实验选用济宁青山羊145只,鲁北白山羊60只,莱芜黑山羊60只作为实验材料。选取GDF9基因作为影响其繁殖性能的候选基因,对这一基因进行克隆测序,并对其外显子进行PCR-SSCP和RFLP分析和序列比对,对所发现的多态位点进行分析,以期寻找出各品种山羊中的优势基因型,为山羊的遗传育种提供实验和理论依据。所得结果如下:1.根据绵羊GDF9基因外显子序列设计引物,应用PCR和RACE技术进行山羊GDF9基因的扩增。扩增的基因全长为4715bp,包含有两个外显子和一个内含子,并已经提交NCBI Gen Bank(登录号:EF446168)。同绵羊GDF9基因序列相比,同源性为98%。2.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术对山羊GDF9基因两个外显子进行多态性分析,结果发现:在第一外显子的1956位点和第二外显子的3855和4085位点均存在多态位点。进一步的测序结果表明,1956位点发生了由A→C的突变,3855和4085位点分别发生了由A→C和G→A的突变。1956位点的突变并没有引起所编码的氨基酸的变化,3855和4085位点的突变则分别导致了所编码的氨基酸由Pro→Gln和Ile→Val的改变。3.对三种山羊外显子进行基因型和多态性分析显示,对于E1-2片段,在三种山羊品种中均检测到了AA, AC和CC基因型,并均以AA型居多,在3个山羊群体中,A等位基因频率明显高于T等位基因频率。鲁北白山羊为低度多态。而莱芜黑山羊和济宁青山羊为中度多态。对于E2-3片段,在三个山羊品种中均检测到了AA,AC和CC基因型,鲁北白山羊,莱芜黑山羊均以AA型居多,并且A等位基因频率明显高于C等位基因频率。鲁北白山羊和莱芜黑山羊为低度多态。济宁青山羊为中度多态。对于E2-4片段,在三个山羊品种中均检测到了AA,AT和TT基因型,鲁北白山羊,莱芜黑山羊均以AA型居多,在3个山羊群体中,T等位基因频率明显高于A等位基因频率。鲁北白山羊和莱芜黑山羊为中度多态,济宁青山羊为低度多态。