第一部分：塞来昔布对人脑微血管内皮细胞放射后凋亡影响及其机制研究　　目的：　　通过培养人脑微血管内皮细胞（Human brain microvascular endothelial cells，HBMECs），观察塞来昔布对于其放射后细胞凋亡改变及其机制。　　方法：　　1.CCK-8细胞毒性实验确定HBMECs半抑制浓度（IC50），依据IC50确定合适给药浓度进行后续实验。　　2.取对数生长期细胞进行实验，细胞分别按空白对照、接受X射线、塞来昔布联合X射线分为对照组（Con）、单纯照射组(IR)、联合组(IR+C)；联合组塞来昔布孵育24h后进行后续实验，照射剂量为8 Gy，实验时间点为照射后6、12、24、48h。　　3.克隆形成实验测定HBMECs放射敏感性，计算在塞来昔布作用下其克隆形成率，求出D0、Dq、SF2、SER值，并绘制细胞存活曲线。　　4.Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组不同时间点 HBMECs的凋亡率。　　5.蛋白印迹法(Western blot)检测Cox-2及P-JNK、Cleaved caspase-3的表达情况。　　结果：　　1.CCK-8细胞毒性实验表明，在塞来昔布作用24h后，10、30、40、50、100μmol/L药物浓度下其抑制率分别为：4.52±0.13%、6.31±0.07%、9.01±0.10%、15.26±0.70%、70.65±0.89%，SPSS19.0软件求得IC50值为81.50±0.75μmol/L，后续实验采用30μmol/L这一亚毒性浓度进行。　　2.塞来昔布对HBMECs放射敏感性影响：单纯照射组及联合组均采用多靶单击模型：y=1-(1-exp(-k*x))^N，算出D0、Dq、SF2、SER值。结果表明，在30μmol/L实验浓度下，未观察到塞来昔布放射增敏作用（SER=0.96）。　　3.流式细胞术检测塞来昔布对受照后HBMECs凋亡影响结果示，与对照组相比，单纯对照组及联合组细胞凋亡率随时间升高，且差异有统计学意义（p<0.05）；联合组与单纯照射组相比，各时间点凋亡率降低，差异有统计学意义（p<0.05）。　　4.Western blot结果所示，对照组HBMECs的Cleaved caspase-3、P-JNK、Cox-2表达量极少，单纯照射组表达量明显增加，且Cleaved caspase-3、Cox-2蛋白表达量随时间延长呈进行性增加；与单纯照射组相比，联合组在受照后各时间点上述蛋白表达均降低。　　结论：　　人脑微血管内皮细胞受照后凋亡率随时间推移而增加，用30μmol/L浓度的塞来昔布处理人脑微血管内皮细胞能降低其受照射后的凋亡率，同时能降低 Cleaved caspase-3、P-JNK、Cox-2蛋白的表达，说明30μmol/L塞来昔布对人脑微血管内皮细胞具有放射保护作用，为塞来昔布通过保护血管内皮细胞的途径用于防护放射性脑损伤提供了初步的理论依据，其机制可能是与30μmol/L浓度的塞来昔布通过抑制Cox-2的表达从而影响了Cleaved caspase-3、P-JNK的表达有关。　　第二部分：塞来昔布对人脑微血管内皮细胞放射后释放6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2影响　　目的：　　探究选择性Cox-2抑制剂塞来昔布对放射后HBMECs释放6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2及其比值影响，确定塞来昔布是否可以降低促血栓形成因子的释放。　　方法：　　1.细胞按如前条件分为三组。　　2.联合组各时间点受照射前24h给予30μmol/L浓度塞来昔布处理。　　3.受照射后分别于6、12、24、48h取出1 ml各组不同时间点细胞培养液，3000r/min离心10 min，取上清。　　4.依据试剂盒说明书进行操作，最后在450 nm处测定各孔OD值，与标准曲线比较后计算出样本6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2浓度，并求得其比值。　　结果：　　与对照组相比，单纯照射组所有时间点及联合组的24h、48h分泌TXB2增多，（p<0.05）；照射后6h以后，6-keto-PGF1α分泌量减少（p<0.05）；联合组与单纯照射组相比，照射后释放TXB2减少（p<0.05）；两者6-keto-PGF1α分泌量变化差异无统计学意义（p>0.05）。两组较对照组TXB2/6-keto-PGF1α升高（p<0.05）；联合组与单纯放射组相比，TXB2/6-keto-PGF1α降低（p<0.05）。　　结论：　　选择性Cox-2抑制剂塞来昔布（30μmol/L）可以有效降低HBMECs受照后释放TXB2的量及TXB2/6-keto-PGF1α比值，但未观察到对6-keto-PGF1α分泌的抑制，提示塞来昔布能抑制人脑微血管内皮细胞受到照射后释放促血栓形成因子，为塞来昔布通过抑制血栓形成的机制减轻放射性脑损伤提供细胞学的佐证。