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癌症是人类面临的一个严重的健康安全问题。目前,癌症死亡率高的有肺癌、结直肠癌、前列腺癌以及乳腺癌,这4种癌症几乎占所有癌症死亡人数的一半。在全球癌症死亡者中肺癌的新增死亡率居高不下。随着医学科学水平的发展,免疫治疗由于其创伤小且针对性强等优势,已成为继手术切除治疗以及放化疗后的一种新的肿瘤治疗方式。而寻找高效且特异的靶抗原是肿瘤免疫治疗的关键。癌/睾丸抗原(Cancer/testis antigens,CTA)在正常组织中限制性表达于睾丸组织,偶尔表达于卵巢和胎盘组织,在各种肿瘤组织中有不程度表达,具有特异的表达模式,因此,具有作为肿瘤免疫治疗特异靶点的潜在优势。近年来,本课题组一直重点探索不同肿瘤组织中黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen,MAGE)-A家族的表达、生物学功能及作为免疫治疗靶点的可行性研究。本研究利用免疫组织化学染色法以及荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)肿瘤组织及其癌旁组织中MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和A12)的表达、EGFR基因扩增和ALK基因重排情况以及与临床生物学指标的关系。进一步探讨了肺癌患者外周血中MAGE-As基因的表达与临床预后之间的关系。主要研究内容和结果如下:第一部分非小细胞肺癌患者肿瘤组织中MAGE-As的表达及其临床意义目的:探讨黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen,MAGE)-As在非小细胞肺癌肿瘤组织中的表达,并分析其与患者临床病理学特征及其预后的关系。方法:1购买上海国家工程研究中心的NSCLC肿瘤组织及相应癌旁组织生物芯片各90例,应用免疫组织化学染色法检测NSCLC肿瘤组织及相应癌旁组织中MAGE-As蛋白的表达。2利用荧光原位杂交技术检测NSCLC肿瘤组织中EGFR基因扩增和ALK基因重排的情况,并分析MAGE-As表达与EGFR基因扩增和ALK基因重排之间的关系。结果:1 NSCLC肿瘤组织中MAGE-As蛋白的阳性表达率为45.56%(41/90)。2 MAGE-As蛋白的表达与患者的临床病理学特征、EGFR基因扩增和ALK基因重排均无相关性(P>0.05)。3 Log-Rank检验显示,MAGE-As蛋白表达阳性的NSCLC患者的生存期均显著低于其表达阴性的患者(P=0.002)。而EGFR基因扩增和ALK基因重排与患者的整体生存率无关(P=0.309)(P=0.189)。4多因素分析结果显示,MAGE-As表达、临床分期和淋巴结转移可做为NSCLC患者预后较差的独立危险因素。结论:MAGE-As蛋白可能是NSCLC的相关抗原,MAGE-As蛋白可作为非小细胞肺癌预后不良的判定指标。第二部分肺癌患者外周血中MAGE-As基因的表达及其临床意义目的:探讨MAGE-As基因在肺癌患者外周血中的表达及其临床意义。方法:1采用多重巢式RT-PCR(multi RT-nested PCR)方法检测122例肺癌患者和30例健康人外周血中MAGE-As mRNA表达水平。2利用特异性酶切方法鉴定该家族成员MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、和-A6的表达情况。结果:1 MAGE-As mRNA在肺癌患者外周血中表达率为17.21%(21/122),MAGE-As家族各成员在肺癌患者外周血中的表达顺序为A2>A6>A4>A3>A1。表达阳性率分别为MAGE-A1 2.46%(3/122)、MAGE-A2 15.57%(19/122)、MAGE-A3 9.02%(11/122)、MAGE-A412.30%(15/122)、MAGE-A6 13.93%(17/122)。2肺癌患者外周血中MAGE-As mRNA的表达与临床指标间的相关性。肺癌患者外周血中MAGE-As mRNA的表达与患者临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移、远端转移、放化疗以及年龄明显相关(均P<0.05)。外周血MAGE-As mRNA的表达率与肺癌患者的肿瘤类型、吸烟、喝酒无明显相关性(均P>0.05)。3肺癌患者外周血中MAGE-A2、-A3、-A4和-A6 mRNA的表达与患者临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移、远端转移有明显相关性(均P<0.05)。另外,远端转移组患者外周血中MAGE-A1的表达阳性率显著高于未转移组(P<0.05),放化疗后肺癌患者外周血中MAGE-A2、-A3和-A6 mRNA的表达阳性率均低于未接受放化疗的患者(均P<0.05)。结论:MAGE-As mRNA在肺癌患者外周血中的表达与肺癌预后相关,有可能作为监测肺癌预后的重要指标,以及检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞的标记。