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鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国东南地区高发的癌症之一。随着放疗技术水平的提高,Ⅰ期、Ⅱ期(国际抗癌联盟,Union for International Cancer Control,UICC分期第7版)鼻咽癌5年生存率分别为100%、95%,但是Ⅳ期鼻咽癌5年生存率较早期鼻咽癌明显降低[1]。晚期鼻咽癌5年生存率低主要有2个原因,首先是鼻咽癌起病隐匿,约60%-70%的患者首次就诊时已处于晚期[2];其次,局部复发和远处转移严重制约着鼻咽癌患者预后。EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)是鼻咽癌发病的主要原因之一,中国头颈部鳞癌综合治疗专家共识(2013版)推荐血清游离EBV-DNA载量作为鼻咽癌疗效监测、复发转移判断的指标之一。但血清EBV-DNA灵敏度较低,有学者认为外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中 EBV-DNA 灵敏度更高,可以应用到鼻咽癌复发转移预测[3]。因此探讨PBMC、血清中EBV-DNA载量在鼻咽癌复发转移中的作用具有理论和临床意义。外泌体是一种起源于细胞内多囊泡体(the multivesicular bodies,MVB)的小囊泡,可以携带蛋白、microRNAs和mRNAs等多种生物分子进行细胞间信息通讯,与癌症的复发转移关系密切。据报道,鼻咽癌患者血清中EBV-miR-BART7高表达[4]。我们猜测EBV-miR-BART7可能通过外泌体途径分泌至细胞外调控细胞生长。来源于鼻咽癌患者血液中的外泌体可能携带EBV-miR-BART7参与此过程。研究目的:探讨血清联合PMBC中EBV-DNA载量在预测鼻咽癌局部复发和(或)远处转移中的作用;利用EBV-miR-BART7作为鼻咽癌细胞来源外泌体标志物的可行性。研究方法:收集197例经病理确诊为鼻咽癌患者及130例非EBV相关疾病体检者的血清及全血样本,其中局部复发和(或)远处转移者43例(复发转移组),治疗后无局部复发和(或)远处转移者154例(无复发转移组),130例非EBV相关疾病体检者作为健康对照组。全血样本经淋巴细胞分离液分离PBMC,利用实时荧光定量PCR法同时检测血清和PBMC中EBV-DNA载量。Kruskal-Wallis检验分析三组血清、PBMC中EBV-DNA载量及其比值(Q值=血清EBV-DNA载量/PBMC中EBV-DNA载量)的差异,并通过实验探索鼻咽癌患者血清中EBV-DNA的存在形式。超速离心C666-1细胞系和NP69细胞系上清液获得外泌体,检测所得外泌体中EBV-miR-BART7载量,将C666-1细胞系外泌体加入NP69细胞中观察对细胞生长的影响,将NP69细胞系外泌体加入NP69细胞中作为对照组。收集15例鼻咽癌患者的血清标本,9例为鼻咽癌治疗后有复发转移,6例为鼻咽癌治疗后无复发转移,检测其血清及PBMC中EBV-DNA载量,将其血清进行超速离心获得外泌体,检测外泌体中EBV-miR-BART7载量。利用Pearson相关系数分析血清EBV-DNA载量与外泌体中EBV-miR-BART7载量的相关性。根据鼻咽癌患者血清EBV-DNA载量高低、Q值高低和血清外泌体EBV-miR-BART7表达量高低分别进行分组,统计分析其生存差异。结果:复发转移组血清EBV-DNA载量中位数水平507.5IU/ml,显著高于无复发转移组0IU/ml(P=0.00)和健康对照组0IU/ml(p=0.00)。复发转移组PBMC中EBV-DNA载量中位数水平496IU/ml,显著高于未复发转移组138IU/ml(P=0.01),与健康对照组626.5IU/ml间无显著差异(P=0.77)。鼻咽癌复发转移组Q值中位数水平0.87,均高于无复发转移组0(p=0.00)及健康对照组0(P=0.00)。C666-1细胞系和NP69细胞系上清液超速离心所得外泌体中均检测到EBV-miR-BART7的表达,并可观察到两种细胞系产生的外泌体对NP69细胞均具有明显的促进生长的作用。在收集15例鼻咽癌患者的血清均检测到了EBV-miR-BART7的表达,且与其血清EBV-DNA载量无明显相关性。血清EBV-DNA载量高的鼻咽癌患者生存低于血清EBV-DNA载量低者,鼻咽癌患者Q值高者生存率低于Q值低者,而血清外泌体中EBV-miR-BART7载量高低未观察到明显生存差异。结论:鼻咽癌患者血清中EBV-DNA以cell-free DNA短片段的形式存在,其载量水平高低与鼻咽癌局部复发和(或)远处转移有关,血清与PBMC中EBV-DNA载量比值(Q值)可作为新的鼻咽癌复发或转移预测的潜在生物标志物,用于鼻咽癌预后预测。C666-1细胞系和NP69细胞系外泌体具有促进细胞生长的作用。鼻咽癌患者血清外泌体中均可检测出EBV-miR-BART7,EBV-miR-BART7可作为血清中鼻咽癌细胞来源外泌体的潜在标志物。