目的：制备Graves’病动物模型，研究TSHRasPNA对Graves’病动物模型的治疗作用。 方法：1.将两个hTSHR膜外区片段(氨基酸29-280，氨基酸314-418)基因的cDNA序列重组到真核表达载体pcDNA3.1(D)/HIS-V5-TOPO中，在证明其在CHO细胞能够表达后，用重组质粒免疫BALB/c小鼠，然后检测动物血清中的T4、TRAb、TSAb、TBAb水平的变化及甲状腺组织中TSHRmRNA的水平，观察甲状腺组织的结构变化。2.根据Genebank公布的TSHR基因序列设计两个asPNA片段，分别与TSHR基因第一个ATG区域及5’UTR互补，研究其对FRTL细胞TSHRmRNA水平的影响；并且在体外证明asPNA能够抑制TSHRmRNA表达后，我们将其注射到GD模型BALB/c小鼠腹腔内，观察TSHRasPNA对小鼠甲状腺TSHRmRNA水平的影响，并检测血清T4、TRAb、TSAb水平，以及通过甲状腺组织的病理变化，进一步观察PNA对Graves病动物模型产生的影响作用。 结果：1.成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1TOPO/TSHRa、pcDNA3.1TOPO/TSHRc，其转染CHO细胞后表达TSHRa和TSHRc，分子量为32.2kD和15.9kD，与预期的蛋白分子量相符。2.将两个重组质粒免疫BALB/c小鼠，从第6周开始血清TRAb水平开始升高，第10周血清T4、TSAb水平开始升高，甲状腺病理学检查发现大部分小鼠甲状腺滤泡上皮增生，滤泡腔增大，胶质浓缩，偶见炎细胞浸润。3.KLH-TSHR38-45与gTSHR共同免疫BALB/c小鼠后，TRAb、TSAb和T4水平从第6周开始明显升高，而且一直维持到12周。病理学检查发现免疫组小鼠甲状腺滤泡增大，滤泡上皮出现增生，胶质浓缩，但是并没有出现淋巴细胞浸润现象。经过重复实验证明，该动物模型比较稳定，并没有出现甲亢和甲低混合现象。4.TSHRNLS-asPNA在体外和体内均被证实能降低TSHRmRNA的水平。NLS-asPNA与FRTL细胞孵育24h后，TSHRmRNA水平明显降低(与0h相比，分别下降了55％和38％)；到48h，分别下降了83％和67％。同样，NLS-asPNA1和NLS-asPNA2治疗组小鼠甲状腺细胞TSHRmRNA水平(1649±224拷贝和1478±1173拷贝)低于NS处理对照组(2806±680拷贝)(P＜0.05和P＜0.01)。说明我们设计的带有NLS结构的TSHRasPNA序列不仅在体外能够降低TSHRmRNA的表达；而且PNA能够通过腹腔给药的途径有效地到达甲状腺组织，从而下调了小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达。5.虽然TSHRasPNA对小鼠血清抗体水平没有明显的影响，但是我们发现TSHRNLS-asPNA下调了小鼠甲状腺TSHRmRNA水平，而且血清T4水平显著回落或有回落的趋势。病理结果显示，NLS-asPNA治疗组甲状腺与NLS-scramblePNA处理组、NS处理对照组比较，无明显滤泡上皮增生和胶质凝固现象，新生滤泡数少。 结论：重组表达质粒pcDNA3.1TOPO/TSHRa、pcDNA3.1TOPO/TSHRc或KLH-TSHR38-45与gTSHR共同免疫BALB/c小鼠，可以产生比较理想的Graves病动物模型。NLS-asPNA通过下调TSHR的表达从而对Graves病动物模型有一定的治疗作用。