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为解决我国鱼粉原料资源短缺,价格昂贵,依赖进口的问题,一系列新型非粮蛋白源作为鱼粉替代物被相继研发,但过量替代鱼粉会对水产动物生长性能和生理健康造成负面影响。因此,选择合适的功能型饲料添加剂协助低鱼粉饲料被水产动物高效利用是有效的应对策略之一。本实验以大口黑鲈为研究对象,探究低鱼粉饲料中添加茶树精油对大口黑鲈生长性能和生理健康的影响。为茶树精油在低鱼粉水产饲料中的应用研究提供理论依据和科学指导。实验一:低鱼粉饲料中添加茶树精油对大口黑鲈生长、肝脏和肠道健康的影响用低鱼粉(175 g/kg)基础上添加0 g/kg(Control)、0.25 g/kg(T0.25)、0.5g/kg(T0.5)、1 g/kg(T1)、1.5 g/kg(T1.5)、2 g/kg(T2)、5 g/kg(T5)和10g/kg(T10)茶树精油的等氮等脂饲料饲喂大口黑鲈(初始体重15.06±0.05 g)8周,研究低鱼粉饲料中添加茶树精油对大口黑鲈生长性能,消化酶活力,血清生化指标,肝脏、肠道组织形态学和肠道菌群的影响。结果表明:随着低鱼粉饲料中茶树精油水平升高,大口黑鲈增重率、特定生长率和蛋白质沉积率呈先上升后下降的趋势,在T1组达到最高;饵料系数呈先降低后升高趋势,在T1组最低(P<0.05)。拟合二次曲线模型分析得出茶树精油添加水平为1.33和1.36 g/kg时大口黑鲈增重率最高,饵料系数最低。与对照组相比,T0.25、T0.5和T1组大口黑鲈胃脂肪酶活力显著升高(P<0.05),肠道胰蛋白酶活力在T1和T2组显著升高(P<0.05)。茶树精油组血清中TP和ABL水平均高于对照组,ALT和AST在T0.25、T0.5和T1组显著低于对照组(P<0.05),GLU在T0.5、T1和T1.5组显著低于对照组(P<0.05)。观察肝脏组织切片发现,与对照组相比,T1和T1.5组肝细胞空泡化现象有所改善,T5和T10组肝脏细胞空泡化程度加剧。中肠组织切片显示各组中肠肌肉层与固有层连接紧密,微绒毛丰富,刷状边缘完整,T0.25和T1组中肠绒毛宽度显著高于对照组(P<0.05)。茶树精油水平为1 g/kg时,肠道菌群中副球菌属、双歧杆菌属和葡萄球菌属的相对丰度显著增加(P<0.05)。综上,低鱼粉饲料中添加适宜水平的茶树精油能够提高大口黑鲈胃肠道消化酶活力和血清生化指标,改善肝脏、肠道组织形态和肠道菌群组成进而促进生长。建议低鱼粉饲料中茶树精油的适宜添加水平为1.33-1.36 g/kg。实验二:低鱼粉饲料中添加茶树精油对大口黑鲈脂代谢、抗氧化能力和免疫的影响在实验一的基础上探究低鱼粉饲料中添加茶树精油对大口黑鲈血清脂代谢生化指标、肝脏脂肪酸合成和β氧化;血清,肝脏和肠道抗氧酶活力和Nrf2-Keap1抗氧化信号通路;头肾、脾脏、肝脏和肠道TLR2-MYD88信号通路和炎症因子表达水平的影响。结果表明:(1)在脂代谢方面,与对照组相比,茶树精油可降低大口黑鲈血清中T-CHO、TG和LDL-C含量,提高HDL-C含量。茶树精油组肝脏粗脂肪含量均显著低于对照组(P<0.05),进一步研究发现茶树精油组大口黑鲈肝脏ppar-α和cpt1表达水平显著升高,acc-βmRNA表达水平显著降低(P<0.05)。(2)在抗氧化方面,低鱼粉饲料中添加1-2 g/kg茶树精油降低了肝脏和肠道中keap1表达水平,上调了nrf2、cat和sod1表达水平,提高了大口黑鲈肝脏、肠道和血清中T-AOC、H2O2和SOD活力,降低MDA和PC的含量。(3)在免疫方面,低鱼粉饲料中添加1 g/kg茶树精油,能够显著降低感染嗜水气单胞菌大口黑鲈肠道中il-1β表达水平,上调tgf-β1表达,茶树精油添加水平高于5 g/kg显著上调了头肾、肝脏、肠道和脾脏中tlr2、myd88、il-1β和tnf-α水平,降低了il-10和tgf-β1表达水平,提示低鱼粉饲料中的茶树精油添加水平过高可能引起组织器官炎症反应。综上所述,低鱼粉饲料中添加茶树精油能够促进肝脏脂肪酸β氧化,减少脂质沉积;激活Nrf2-Keap1信号通路,增强抗氧化基因表达和抗氧化酶活性,提高抗氧化能力;促进抗炎细胞因子表达,抑制促炎细胞因子表达,提高大口黑鲈免疫力。实验三:松油烯-4-醇对脂多糖诱导的大口黑鲈肝细胞炎症、抗氧化和凋亡反应的影响经GC-MS检测后得出实验所用茶树精油产品中主要有效成分为松油烯-4-醇(相对含量28.8%),因此本研究提取分离大口黑鲈肝细胞,用脂多糖(LPS,100μg/m L)构建炎症模型,探究松油烯-4-醇对肝细胞抗氧化、炎症和凋亡的分子调节机制。结果表明:(1)松油烯-4-醇降低了LPS诱导的肝细胞中tlr2、myd88、nf-κb、il-1β的表达水平,提高了il-10的表达水平,增强肝细胞抗炎能力。(2)与LPS组相比,松油烯-4-醇能够降低LPS诱导的肝细胞中keap1表达水平,提高nrf2、cat、sod1和ho-1表达水平,降低细胞中ROS含量,提高肝细胞抗氧化能力。(3)松油烯-4-醇降低了肝细胞中促凋亡基因fas-l、bax、caspase3、caspase8、caspase9的表达水平,增强了抗凋亡基因bcl-2表达水平。综上所述,松油烯-4-醇能够增强LPS诱导的肝细胞抗氧化和抗炎能力,缓解细胞凋亡。