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孢囊线虫系最重要的植物病原线虫类群之一,其中许多种类引起的线虫病害给农业生产造成严重的损失。作者于2014～2016年期间,对浙江省寄生雷竹的孢囊线虫进行了系统的研究,包括鉴定该线虫的种类、建立特异性分子检测方法、研究该线虫的孵化特性和影响孵化的主要因素及克隆了该线虫的β-1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。主要研究结果概述如下:1.朝鲜孢囊线虫(Heterodera koreana)——浙江省孢囊线虫的新记录种采用形态学和分子生物学的方法,对采自浙江省临安市雷竹根围孢囊线虫进行鉴定,综合形态特征及形态测量值、ITS区、28SD2D3区扩增结果等,鉴定其为朝鲜孢囊线虫(Hkoreana)。该线虫隶属于孢囊线虫属,系浙江省孢囊线虫的新记录种。2.基于ITS序列建立的朝鲜孢囊线虫特异性分子检测方法通过比对10种不同来源的23个孢囊线虫群体的ITS序列,筛选出朝鲜孢囊线虫的特异性引物对Hk/F,Hk/R,结合内标引物D2A,D3B组成的双重PCR特异性分子检测体系。内标引物D2A,D3B在供试线虫中的扩增产物均为786bp,用于检测DNA的质量,避免出现假阴性;特异性引物Hk/F,Hk/R在朝鲜孢囊线虫中的扩增产物为449bp,而在其它供试线虫中均不能得到该大小的产物。其检测灵敏度达1/256条2龄幼虫和1/8192个孢囊。3.朝鲜孢囊线虫的孵化特性及2龄幼虫的生活力研究设置5℃,20℃、25℃、28℃、30℃和35℃等六个温度梯度,观察不同温度对朝鲜孢囊线虫孵化的影响。结果显示,朝鲜孢囊线虫的适宜孵化温度范围是20～30℃,最适孵化温度是28℃;35℃下2龄幼虫孵化量很少;分别观察Zn2+、Cu2+及雷竹根围土壤渗出液对其孵化的影响,结果显示:Zn2+和雷竹根围土壤渗出液明显的促进其孵化,孵化量约为对照的1.2倍;Cu2+明显的抑制线虫的孵化,孵化量是对照的0.5倍。将新孵化的2龄幼虫置于上述温度梯度中,观察2龄幼虫的生活活力。结果显示,低温有利于2龄幼虫的存活,随着温度的升高,2龄幼虫的活力下降。4.朝鲜孢囊线虫β-1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长序列的克隆以朝鲜孢囊线虫为材料,采用RT-PCR和RACE技术,获得了 β-1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA的全长序列,并命名为Hk-eng2(GenBank登录号:KY314987),该cDNA全长为1658 bp,包含一段长度为29bp的5’非编码序列(5’-UTR)和138 bp的3’非编码序列(3’-UTR);包括长为1488 bp的开放阅读框,编码一 496氨基酸的多肽,等电点(PI)为7.15,理论分子量为51.7kDa;含有糖基水解酶的保守结构域,属于纤维素酶第五家族成员,N端具有15个氨基酸残基组成的信号肽,C端含有细菌式样的纤维素结合域(CBDⅡ)。