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于杭州市郊采集一点红萝卜植株,提取叶片组织中的dsRNA,获得2条大小在1700-2000bp范围之内的dsRNA条带。此结果与我们以前报道的结果类似。采用SPAT和RT-PCR方法获得上述dsRNA条带的cDNA。克隆测序的结果显示两条较大的dsRNA条带长度分别为1866bp和1791bp,且核酸序列与我们以前报道的RasR1和RasR2完全相同。与此同时我们还得到一条新的序列,全长1778bp,将其命名为RasR6。
RasR6正链中含有一个ORF,编码的蛋白质含有502个氨基酸,分子量约为55.1kDa。在GenBank数据库中通过BLAST-P程序搜寻序列与之相似的蛋白并以此推测RasR6的功能。结果显示有5条蛋白序列与RasR6编码的蛋白具有同源性,且这5条序列均编码Partitiviridae成员的CP(coatprotein)。根据以上分析我们推测RasR6的功能是编码萝卜某一病毒的CP。
RasR6中A、G、T和C的含量分别为24.63%、18.11%、26.43%和30.82%,很明显G的含量比其它三种碱基的含量低,这种现象在已报道的Partitiviridae成员中普遍存在。RasR6与RasR.1的5’UTR长度分别为79bp和70bp,二者同源性为65.4%,共同拥有4个保守区域,包括末端的5’AGAAAAA笔TTT3’。RasR6的3’UTR(190bp)明显长于RasR1的3’UTR(74bp),它们之间的同源性为25.7%,但两者也有一些保守区域,包括3’末端的5’AAAATAAAA3’。RasR6序列两端的UTR分别与相应RasR2序列两端的UTR有较高的同源性。RasR6与RasR2的5’UTR长度相当,分别为79bp和77bp,同源性高达82.3%,二者具有3个较长的保守区域,包括末端的5’AGAAAAATTTTAGA3’;RasR6与RasR2的3’UTR长度也相当,分别为190bp和196bp,二者同源性为66.0%,并且同时具有多个保守区域,包括3’末端的5’TAAAAAAAA3’。此外,RasR2和RasR6的全长序列也拥有多个保守区域,二者同源性为54%。但是,核苷酸序列比对结果同时也显示:RasR6与来源于萝卜的RasR3,RasR4和RasR5的UTR则没有明显的相似性。
根据RasR1,RasR2和RasR6共存于同一株萝卜的事实(克隆和杂交实验结果均证实这一结论)以及它们之间UTR比对的信息,我们推测这三条dsRNA同属于已经报道的Raphanussativusvirus1(RasV1)。由于RasR6与5个Partitiviridae成员的CP具有一定的相似性,据此推测RasR6与RasR2共同编码该病毒的CP,但同时也不排除它作为satelliteRNA存在的可能性。
关于RasR6也编码RasV1的CP与目前对Partitiviridae成员的描述不一致,如果RasR6编码CP,那么RasR6与RasR2二者之间是如何相互作用的?为什么Raphanussativuscrypticvirus1中含有两种不同的CP?以上问题都有待于深入研究。因此,本研究的结果为正确定义该科病毒特征奠定了基础。