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(一)目的1.研究和建立多病种综合监测机制和模式。2.描述浙江省主要蜱传病病原宿主动物和媒介蜱地区分布3.描述浙江省宿主动物和主要媒介主要蜱传病病原感染状况(二)内容与方法1.采用现场调查方法,对不同地理地貌地区主要蜱传病病原宿主动物和媒介蜱种类进行调查。2.现场采集标本进行分类鉴定后,啮齿动物采集肝脾标本研磨后提取DNA,媒介蜱标本研磨后提取DNA,用分子生物学方法检测浙江省主要蜱传病病原感染状况。3.对检获的阳性标本,每个地区每个病种均选取电泳条带较清晰的样本进行测序,测序后上网比对,确定阳性病种种类。4.对测序好的样本用MEGA5.0构建系统进化树,并进行系统进化分析。5.用SAS9.0分析不同季节、不同地区宿主动物和媒介蜱病原体感染状况。(三)结果1.宿主动物监测：浙江省6个监测点四个季度共布放鼠笼6755笼次,捕获啮齿动物630头,捕获率为9.33%,其中第一季度118头,第二季度148头,第三季度237头,第四季度127头；从本次监测情况看,黑线姬鼠和社鼠为浙江省野外优势鼠种,共捕获黑线姬鼠295头,占捕获总数的46.83%,社鼠179头,占捕获总数的28.41%。2.媒介监测：六个研究点均按照研究方案的要求,共从牛、羊、狗、鼠等寄生宿主身上捕获寄生蜱736只,其中长角血蜱和镰形扇头蜱是浙江省主要优势蜱种,分别捕获379只(48.65%)和168只(21.57%)。从蜱种群的季节分布看,浙江省长角血蜱、镰形扇头蜱、微小牛蜱和血红扇头蜱从第一季度到第四季度,捕获数量呈逐步下降趋势,而中华硬蜱和粒形硬蜱则以第四季度为主。长角血蜱寄生的寄主较为广泛,牛、羊、狗、鼠等寄主身上均有捕获,微小牛蜱寄主较为单一,只在牛身上捕获。啮齿动物身上寄生蜱种类有长角血蜱、中华硬蜱和粒形硬蜱；家养动物羊身上寄生的蜱种类较多,有长角血蜱、镰形扇头蜱、中华硬蜱粒形硬蜱,狗身上寄生宿主较为单一,均为镰形扇头蜱和血红扇头蜱,牛身上寄生有长角血蜱和微小牛蜱。部分监测点由于蜱数量较少,因此没有全年开展游离媒介监测,六个监测点只在第一季度使用布旗法开展游离蜱监测,全省游离蜱密度为8只／小时,其中仙居密度最高,为32只／小时,海宁、龙游和建德最低,均未捕获游离蜱。3.实验室检测：本次蜱传病病原综合监测研究实验室采用分子生物学方法对每个标本共检测巴尔通体、巴贝西原虫、嗜吞噬细胞无形体、查菲埃立克体、莱姆病螺旋体和立克次体6种病原体,在啮齿动物中6种病原体均有检出,而在蜱中只检出巴贝西原虫、嗜吞噬细胞无形体、查菲埃立克体和立克次体4种。从鼠种携带的病原体看,浙江省各监测点捕获的啮齿动物中,从社鼠中检出全部6种病原体,而黑线姬鼠、白腹巨鼠和东方田鼠各检出3种,黄毛鼠和褐家鼠均只检出一种病原体。从检测出阳性的蜱种看,浙江省从长角血蜱中检出4种病原体,从中华硬蜱中检出2种病原体,而从血红扇头蜱中只检出1种病原体。在630份啮齿动物标本中共检出巴尔通体阳性标本28份,阳性率为4.44%,阳性率最高的是社鼠5.59%(10份)；检出巴贝西原虫阳性标本22份,阳性率为3.49%,阳性率最高的是社鼠7.82%(14份)；检出嗜吞噬细胞无形体阳性标本26份,阳性率为4.13%,阳性率最高的是社鼠11.17%(20份)；检获查菲埃立克体阳性标本8份,阳性率为1.27%,阳性率最高的是白腹巨鼠11.76%(2份)；检获莱姆病螺旋体阳性标本5份,阳性率为0.79%,检获阳性的鼠种为社鼠,阳性率为2.79%(5份)；检出4份立克次体阳性标本,阳性率为0.63%,阳性率最高的是白腹巨鼠5.88%(1份)；而在779份蜱标本中未检出巴尔通体和莱姆病阳性标本。在6份长角血蜱中检出巴贝西原虫阳性,总阳性率为0.77%,分蜱种阳性率为1.58%；检获嗜吞噬细胞无形体阳性12份,阳性率为1.54%,检出阳性的蜱种为中华硬蜱和长角血蜱,阳性率分别为8.99%(8份)；检获8份查菲埃立克体阳性,阳性率为1.03%,检获阳性的蜱种为长角血蜱,阳性率为2.11%(8份)；检出7份阳性标本,阳性率为0.9%,检出阳性的蜱种为长角血蜱、中华硬蜱和血红扇头蜱,阳性率分别为0.79%(3份)、3.37%(3份)和1.03(1份)。4.对检测阳性的标本进行测序,然后对序列进行进化分析,浙江省检测出的嗜吞噬细胞无形体、查菲埃立克体在进化树上分布较散,但有部分序列与我国周边国家、云南、美国等地的序列亲缘关系较近,而巴尔通体等则与汉赛巴尔通体等亲缘关系较近,巴贝西原虫经比对及进化分析发现浙江省存在有微小巴贝西原虫、双芽巴贝西原虫等病原体种类,伯氏疏螺旋体则与浙江省周边地区检出的序列相近。5.不同种类啮齿动物阳性标本检出情况比较对不同种类啮齿动物各病原体检出情况进行Fisher exact统计检验,社鼠巴贝西原虫阳性检出率和其它鼠种相比差异有统计学意义(P<0.05)、社鼠HGA阳性检出率和其它鼠种相比差异有统计学意义(P<0.05)和白腹巨鼠的HME阳性检出率和其它鼠种相比差异有统计学意义(P<0.05)。6.不同监测点阳性标本检出情况比较对各病原体在不同监测点检出情况进行比较,海宁巴尔通体阳性检出率与其他监测点相比差异有统计学意义,建德HGA阳性检出率与其他监测点相比差异有统计学意义,仙居HME阳性检出率与其他监测点相比差异有统计学意义。7.不同季节阳性标本检出情况比较对不同季节阳性标本检出情况进行统计学分析发现,巴尔通体和立克次体阳性检出率差异无统计学意义,巴贝西原虫一季度阳性检出率与其它季节相比差异有统计学意义(P<0.05),HGA二季度和四季度阳性检出率与其它季节相比差异有统计学意义(X2=15.261,P<0.05),HME一季度阳性检出率与其它季节相比差异有统计学意义(P<0.05),莱姆病一季度阳性检出率与其它季节相比差异有统计学意义(P<0.05)。(四)结论1.通过对蜱传病病原综合监测项目的实施,使监测工作更加统一、规范,标本得到了充分利用,一份标本同时检测了巴尔通体、巴贝西原虫、嗜吞噬细胞无形体、查菲埃立克体、莱姆病和立克次体等多种病原体。2.浙江省存在对人致病的巴尔通体、巴贝西原虫、嗜吞噬细胞无形体、查菲埃立克体、莱姆病和立克次体病原体,并且在啮齿动物和蜱中均有一定的感染率,有存在该类传染病自然疫源地的可能。3.社鼠是浙江省野外优势鼠种,是本次研究所捕获的不同种啮齿动物中蜱媒传染病感染谱和感染率最高的,其它鼠种如白腹巨鼠、黑线姬鼠等也有感染现象。4.对不同地区不同蜱媒传染病阳性检出率进行比较发现,浙北平原区的海宁巴尔通体检出率较高,建德HGA阳性检出率较高,仙居HME阳性检出率较高,且与其他地区相比差异均有显著性,说明在浙江省不同地理地貌地区可能存在着不同的蜱媒传染病种类；5.4、啮齿动物感染巴贝西原虫和感染其它蜱传细菌性病原体存在一定的相关性。