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干旱胁迫常常影响植物生长发育造成作物严重减产。棉花是我国重要的经济作物,在棉花主栽区,干旱严重影响棉花产量。因此,采用转基因技术培育耐旱棉花具有重要的意义。
本研究将紫杆柽柳(Tamarix androssowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株为阳性的转化株,在室内条件下,对转化株幼苗进行水培实验,并用12%(w/v)PEG—6000处理12小时模拟干旱胁迫。结果显示,干旱胁迫之后,转LEA基因棉花基因表达量显著增加;丙二醛生成量显著降低;游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白的生成量显著增加;棉花表型分析也证明了转LEA基因棉花抗旱性有提高。培养45天后,转LEA基因棉花的生物量高于非转基因棉花。
将从极端耐早植物齿肋赤藓(Syntrichia caninervis)中克隆得到的ScALDH21基因通过花粉管通道法对新农棉1号进行遗传转化,实验中通过卡那霉素点涂棉花叶片结合室内分子生物学手段对转基因棉花进行验证,最终获4株T3代转ScALDH21基因棉花阳性株。在室内条件下,对转化株幼苗进行18天的干旱处理,然后复水。结果表明,于早处理后,转ScALDH21基因棉花基因表达量显著增加;转ScALDH21基因棉花可以有效噌加棉花气孔导度及叶绿素含量,增强棉花的蒸腾速录和净光合速率;转ReALDH21基因棉花可以有裁降低丙二醛生成量,提高游离脯氨酸和可溶性蛋白的生成量,培养45天后,转ScALDH21基因棉花的生物量高于非转基因棉花。
本研究结果表明,在干旱胁迫条件下,转LEA基因和转ScALDH21基因棉花表现出了优良的生长和生理优势,转LEA基因和转ScALDH21棉花能提高棉花的抗早能力。