目的:肥胖症是一种发病率较高的慢性代谢性疾病,其形成与肠黏膜免疫、慢性炎性反应及肠道菌群异常息息相关。本文基于经典的食源性脾胃虚弱肥胖模型,探索健脾益气针法对肥胖小鼠肠道菌群结构与功能、肠黏膜TLRs/TRAF6信号通路的调控模式,为中医药防治肥胖提供科学依据。方法:第一部分,脾胃虚弱型肥胖小鼠模型建立,分组与电针治疗。在食源性肥胖模型基础上,按照中医脾胃虚弱主要证候（食少纳呆、乏力、便溏）,结合每日进食量、旷场实验及粪便含水量等指标,筛选符合脾胃虚弱条件的候选肥胖鼠。再通过Lee’s指数、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血糖（Glu）、瘦素（LP）、脂联素（ADPN）、T淋巴细胞亚群(CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺及CD⁺_11c)及炎症因子（IL-6、IL-10、TNF-α）等指标,进行综合评价,获得脾胃虚弱型肥胖小鼠。随机将脾胃虚弱型肥胖小鼠分成模型组（M）、电针7天组（A7）、电针14天组（A14）、电针21天组（A21）及电针28天组（A28）。电针组在天枢、关元、足三里、三阴交等四穴上施以健脾益气针法,得气后接通电针治疗仪。观察不同时间窗口,各组动物体重、Lee’s指数、脏器指数、附睾周围脂肪质量、CHO、TG、LP、ADPN、胆囊缩宫素（CCK）、游离脂肪酸（FFA）、载脂蛋白A1（apo-A1）、载脂蛋白B（apo-B）、T淋巴细胞亚群、炎症因子及附睾脂肪形态学特征差异。第二部分,肠黏膜TLRs/TRAF6信号通路检测。采用免疫组织化学法方法比较派氏小体（PP）上TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₇、TLR₉等五种蛋白的分布密度差异,通过荧光定量PCR检测TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₇、TLR₉以及下游关键调节因子MyD88、TRAF6等基因相对表达量的差异。第三部分,肠道菌群结构与功能分析。通过16S rDNA测序,观察肠道菌群不同层次（门、纲、目、科、属）的物种相对丰度、物种分类树、样品复杂度、多样性等方面差异。通过宏基因组测序,观察各组肠道菌群的重要功能基因表达水平,分析物种类别、丰度,注释相关功能等。结果:脾胃虚弱型肥胖模型组体重、Lee’s指数、粪便含水量、CHO、TG、LP、ADPN、CD₈⁺、CD⁺_11c、IL-6、IL-10、TNF-α的含量显著高于正常组（P<0.01）,运动时间T、运动距离D、CD₄⁺、CD₄⁺/CD₈⁺比值明显低于正常组（P<0.01）。健脾益气针法治疗肥胖后,电针各组体重、Lee’s指数、附睾周围脂肪质量、CHO、TG、LP、ADPN、CCK、FFA、apo-B、IL-6、IL-10、TNF-α、CD₈⁺、CD⁺_11c脂肪细胞直径显著降低（P<0.01）,apo-A1、apo-A1/apo-B、CD₄⁺含量与CD₄⁺/CD₈⁺明显升高（P<0.01）,与A7组相比,A21组及A28组改善明显。PP中TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₉等蛋白分布密度高于正常组（P<0.01）,TLR₇低于正常组。针灸干预后,TLRs蛋白分布密度显著改善,其中A21组的改善调节变化明显（P<0.05）。PP上之TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₉及下游关键调控因子TRAF6等基因的相对表达量显著增加（P<0.01）,TLR₇及MyD88基因显著降低（P<0.01）。健脾益气针法干预后,下调TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₉、TRAF6等基因相对表达量,上调TLR₇及MyD88基因相对表达量（P<0.01）,与A7组相比,A21、A28组改善明显（P<0.05）。模型组肠道菌群物种相对丰度和聚类热图分析,厚壁菌门（Firmicutes）、软壁菌门（Tenericutes）、互养菌门（synergistetes）显著高于正常组,拟杆菌门（Bacteroidetes）、嗜热丝菌门（Caldiserica）、变形菌门（proteobacteria）等显著低于正常组。针刺干预后,菌群失调得以逐步改善,尤其是A7组暖发菌门（Caldithrix）、迷踪菌门（Elusimicrobia）、泉古菌门（Crenarchaeota）等菌门较为接近正常组。NMDS分析、样品聚类分析、β多样性指数分析、T-test组间物种差异分析及LEfSe分析,模型组与正常组存在显著差异（P<0.01）。针灸干预后改善显著,尤其A21组效果最佳（P<0.05）。KEGG数据库中,模型组K01915、K02057、K03081、K10117、K10440、K10118、K10439、K1019等代谢功能基因表达显著高于正常组（P<0.01）,K01601、K02110等表达明显低于正常组（P<0.01）;eggNOG数据库中,模型组COG1129、COG4753、COG2972、COG0395、COG1663、COG1175、ENOG410XNMH等相关基因的同源性表达明显高于正常组（P<0.01）,COG1850、COG2801、COG3293等表达明显低于正常组（P<0.01）;CAZy数据库中,模型组GH65、GH25、GH18、GH32、GH1、GT35、CE4等碳水化合物酶功能基因的表达明显高于正常组,GTS、GTS1等表达明显低于正常组（P<0.01）;针刺干预后,逐步改善失调功能基因,其中A21组变化明显。结论:（1）在食源性肥胖基础上筛选符合脾胃虚弱型肥胖鼠,成功建立脾胃虚弱型肥胖模型,健脾益气针法具有显著减肥效果。（2）健脾益气针法调节肠黏膜上TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₇、TLR₉等五种蛋白分布密度;下调TLR₁、TLR₂、TLR₄、TLR₉、TRAF6等基因相对表达量,上调TLR₇、MyD88等基因相对表达量,调整TLRs/TRAF6信号通路改善肠黏膜免疫功能紊乱,降低肠黏膜慢性炎症反应,其中干预21天达到最佳治疗效果。（3）健脾益气针法改善肠道菌群的结构及数量,良性调整软壁菌门（Tenericutes）、互养菌门（synergistetes）、嗜热丝菌门（Caldiserica）、变形菌门（proteobacteria）、暖发菌门（Caldithrix）、迷踪菌门（Elusimicrobia）、泉古菌门（Crenarchaeota）等,系统调控K01915、K02057、K03081、K10117、K10440、K10118、K10439、K1019、COG1129、COG4753、COG2972、COG0395、COG1663、COG1175、ENOG410XNMH、GH65、GH25、GH18、GH32、GH1、GT35、CE4等功能基因,促使异常功能基因表达恢复正常,促进建立新的微生态环境;健脾益气针法治疗肥胖在最初7天内效果最明显,在21天时达到最稳定状态,之后有轻微反弹趋势。简而言之,通过健脾益气针法良性调控TLRs/TRAF6信号转导通路,调整肠道菌群的结构和功能,促进新的健康微生态的建立,达到有效控制肥胖的目的。