【摘 要】
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背景和目的： bHLH(basic helix-loop-helix，碱性螺旋-环-螺旋)转录调控因子是发育过程中转录网络的重要组成部分，广泛参与神经和肌肉发生、细胞增殖分化、细胞谱系的决定和性
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背景和目的： bHLH(basic helix-loop-helix，碱性螺旋-环-螺旋)转录调控因子是发育过程中转录网络的重要组成部分，广泛参与神经和肌肉发生、细胞增殖分化、细胞谱系的决定和性别决定等基本生理过程。Mash1(mammalian achaete-scute homolog 1)基因属于bHLH转录调控因子家族成员之一，在神经发生、神经发育和神经分化过程中发挥重要的调控作用。Mash1基因功能缺失导致神经发育异常、神经元分化减少及特定亚型神经元缺失；而其过表达则可以促进P19细胞、神经干细胞和胚胎干细胞向神经细胞分化。由于Mash1基因的过表达研究多数应用的是质粒型表达载体，转染效率较低且不能稳定表达，如采用合适的载体将Mash1基因导入干细胞或体内或将转染Mash1基因的靶细胞植入损伤局部，使其在损伤部位持续分泌Mash1蛋白，必将有利于神经分化和神经损伤的修复。因此，为进一步探讨Mash1基因在神经发育和干细胞神经分化中的调控作用及为基因治疗神经系统疾病奠定基础，我们拟构建重组Mash1基因慢病毒表达载体。 实验方法： 1．Mash1cDNA克隆及序列分析 从小鼠胚胎中提取总RNA，逆转录为cDNA，PCR扩增获得小鼠Mash1基因，回收纯化；以T4连接酶连接Mash1基因片段和pGEM-T载体，转化感受态细菌JM109后经蓝白筛选和以T7／SP6为引物PCR扩增筛选鉴定重组克隆；小提重组克隆质粒DNA，应用限制性内切酶BamH Ⅰ和Xhol Ⅰ对其进一步酶切鉴定阳性克隆；对鉴定出的阳性重组质粒pGEM-T-Mash1进行基因测序。
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