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目的:1.利用Meta分析方法分析叶酸及其他一碳单位代谢相关B族维生素(维生素B2、维生素B6、维生素B12)水平与食管癌的关系。2.用不同浓度的微囊藻毒素-LR染毒人正常食管上皮细胞,探讨微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞活性及诱导人正常食管上皮细胞凋亡的作用,并进一步探讨可能的凋亡途径。3.用叶酸和维生素B6干预经微囊藻毒素-LR染毒的人正常食管上皮细胞,观察其对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、P53、P16 mRNA表达及蛋白水平的影响,探讨叶酸及维生素B6干预对微囊藻毒素-LR促细胞增殖的抑制作用,为进一步深入研究叶酸及维生素B6对预防、控制微囊藻毒素-LR对人类健康的影响提供理论基础,为将来在我国食管癌高发区开展营养干预提供科学依据。方法及结果:1.根据流行病学观察性研究中的Meta分析指南要求,制订详细的文献纳入排除标准,纳入2018年5月20日之前发表的符合要求的相关文献,对符合纳入标准的文献提取相关数据并进行分析。用比值比（Odds Ratio,OR）代表Meta分析的合并统计量,运用Stata 11.0软件对各组数据进行异质性检验,并选择合适的模型进行Meta分析,根据研究结果进行分层分析,然后分别利用Begg’s检验和Egger’s检验来计算Meta分析的发表偏倚。结果显示:本项Meta分析共纳入25篇相关文献（22篇病例对照研究,3篇队列研究）,提取每项研究的第一作者、发表年限、病例来源等基本信息。结果显示:膳食中叶酸、维生素B2、维生素B6、维生素B12水平与食管癌关系的Meta分析的合并OR值及95%可信区间（95%Confidence Interval,95%CI）分别为0.63（0.54-0.74）、1.03（0.88-1.20）、0.59（0.48-0.72）、1.26（1.01-1.59）;I2分别为53.6%、37.6%、64.6%、71.8%。2.首先以低剂量的微囊藻毒素-LR（0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001μg/mL）染毒处理人正常食管上皮细胞24 h,CCK8细胞增殖毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK8）检测细胞活力,选择合适浓度的微囊藻毒素-LR作为模拟细胞癌变过程,建立细胞损伤模型的剂量;然后以高剂量的微囊藻毒素-LR（1、3.75、7.5、15、30、50μg/mL）染毒处理人正常食管上皮细胞24 h,CCK8检测细胞活力。计算出半数抑制浓度(50%Inhibitory Concentration,IC50)为24μg/mL,因此选用6、12、24μg/mL(1/4IC50、1/2 IC50、IC50)的微囊藻毒素-LR为后续开展细胞凋亡实验的染毒浓度;最后用6、12、24μg/mL微囊藻毒素-LR染毒人正常食管上皮细胞24 h,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞Caspase-3、Caspase-9基因mRNA的表达情况,蛋白质印迹法（Western Blot,WB）测定Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,低剂量微囊藻毒素-LR均可以提高人正常食管上皮细胞活力;高剂量组中用不同浓度的微囊藻毒素-LR染毒处理人正常食管上皮细胞24 h后,与对照组相比,3.7550μg/mL的微囊藻毒素-LR均能使人正常食管上皮细胞活力降低且差异具有统计学意义。与对照组相比,6、12、24μg/mL微囊藻毒素-LR染毒细胞24 h后,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达均增加;Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均上调。3.以0.00005μg/mL的微囊藻毒素-LR染毒人正常食管上皮细胞,同时加入不同浓度的叶酸及维生素B6干预,CCK8检测细胞活力,选择200μg/mL的叶酸及维生素B6作为实验干预剂量;然后以0.00005μg/mL的微囊藻毒素-LR染毒人正常食管上皮细胞,同时加入叶酸及维生素B6干预,观察细胞周期、细胞凋亡改变情况;RT-PCR检测细胞P16、P53 mRNA的表达情况;WB测定P16、P53蛋白表达水平。结果显示:与微囊藻毒素-LR染毒模型组相比,加入200μg/mL的叶酸和维生素B6干预可以抑制人正常食管上皮细胞增殖。与对照组相比,0.00005μg/mL的微囊藻毒素-LR染毒细胞24 h后,细胞凋亡率降低,S期细胞比例增加,P16、P53 mRNA表达及蛋白表达均下调;加入叶酸和维生素B6干预后,与微囊藻毒素-LR染毒模型组相比,细胞凋亡水平升高,S期细胞比例减少,P16、P53 mRNA表达及蛋白表达均上调。结论:1.膳食叶酸、膳食维生素B6的水平与食管癌发病风险呈负相关;膳食维生素B12的摄入水平与食管癌发病风险呈正相关;血清叶酸、维生素B2、血清维生素B6水平与食管癌发病风险之间的关联尚不明确。2.低浓度的微囊藻毒素-LR可以提高人正常食管上皮细胞活力,高浓度的微囊藻毒素-LR会诱导人正常食管上皮细胞凋亡,且可能与细胞凋亡相关的信号分子Caspase-3、Caspase-9的激活有关。3.低剂量的微囊藻毒素-LR可以促进人正常食管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,叶酸及维生素B6对微囊藻毒素-LR促人正常食管上皮细胞增殖具有一定的抑制作用。