目的:药物性牙龈增生（Drug-induced gingival overgrowth,DIGO）是因长期服用某种药物而引起的牙龈增生和体积的增大。但由硝苯地平（nifedipine,NIF）介导的DIGO的发生机制尚不清楚。有研究表明,NIF介导的DIGO中,细胞的增殖及细胞周期的失衡可能与疾病的发生有关。随着miRNA的发现,越来越多的研究证明miRNA可以调控细胞的增殖、凋亡、周期。本研究初步探讨miR-3940-5p在NIF刺激牙龈间充质干细胞（gingival mesenchymal stem cells,GMSCs）中的功能及机制。方法:1.临床上采集成人健康的牙龈,采用酶消化培养法体外分离培养GMSCs。2.构建稳定转染的细胞系:利用慢病毒转染的方法转染GMSCs,获得实验组过表达miR-3940-5p（miR-3940-5p mimics）及空载体对照组（Consh）。通过real-time RT-PCR法检测miR-3940-5p在转录水平的表达,测定转染效率,确定过表达的效果。3.采用流式细胞术-CFSE法检测对照组（Consh）及实验组（miR-3940-5pmimics）在0ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml浓度的NIF刺激48h后的增殖情况。4.采用流式细胞术-PI法检测对照组（Consh）及实验组（miR-3940-5p mimics）在NIF最适刺激浓度下刺激48h后的细胞周期水平的变化,并应用real-timeRT-PCR及Western Bolt技术检测细胞周期相关基因的表达。5.检测miR-3940-5p对GMSCs定向分化功能的影响。采用成骨/成牙分化诱导培养液,在体外条件下对稳定转染了miR-3940-5p mimics及Consh的GMSCs进行成骨/成牙向分化诱导,观察成骨/成牙分化的指标,包括碱性磷酸酶活性测定,茜素红染色及钙离子浓度测定,并应用real-time RT-PCR检测成骨过程中关键转录因子DLX5（Distal-Less Homeobox 5）在成骨/成牙分化中的影响,以及检测成骨/成牙分化的标志物牙本质涎磷蛋白（Dentin sialophosphoprotein,DSPP）、牙本质基质蛋白1（Dentin matrix acidic phosphoprotein 1,DMP1）,以观察对成骨/成牙分化的影响。结果:1.流式细胞术-CFSE法检测增殖结果表明:在NIF浓度为1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml时对GMSCs均有促进增殖的作用。在不同浓度NIF（0ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml）刺激下,过表达miR-3940-5p均可抑制GMSCs的增殖。2.流式细胞术-PI法检测周期结果表明:过表达miR-3940-5p在NIF浓度为0ug/ml、1ug/ml时将GMSCs细胞周期阻滞在G0/G1期。3.Real-time RT-PCR结果显示:过表达miR-3940-5p组,p15^INK4b,p18^INK4c和p19^INK4d在NIF浓度为0ug/ml、1ug/ml时表达均上调,p21^Cip仅在NIF浓度为1ug/ml时表达上调。Western Bolt结果显示:在NIF浓度为0ug/ml、1ug/ml时,过表达miR-3940-5p组,CyclinA的表达是上调的,CyclinE的表达是下调的而CDK2及CKD4的表达是无差异的。CyclinD的表达在NIF浓度为0ug/ml时是下调的而在NIF浓度为1ug/ml时是上调的。4.成骨/成牙诱导分化检测结果表明:过表达miR-3940-5p在体外条件下促进GMSCs的成骨/成牙分化。表现为成骨/成牙分化早期指标碱性磷酸酶活性实验组比对照组升高;晚期矿化指标茜素红染色及钙离子定量分析实验组比对照组明显增强;real-time RT-PCR检测结果表明过表达miR-3940-5p在mRNA水平促进GMSCs体外成骨/成牙向分化指标DSPP,DMP1的表达,以及成骨/成牙向分化关键转录因子DLX5的表达也升高。结论:1.不同浓度的NIF对GMSCs均有促进细胞增殖的作用。2.在不同浓度的NIF刺激下,过表达miR-3940-5p抑制GMSCs的细胞增殖。3.过表达miR-3940-5p通过上调p15^INK4b、p18^INK4c、p19^INK4d和CyclinA以及下调CyclinD和CyclinE的表达将GMSCs细胞周期阻滞在GO/G1期;在NIF（1ug/ml）刺激下过表达miR-3940-5p通过上调p15^INK4b、p18^INK4c、p19^INK4d、p21^Cip1、CyclinA和CyclinD以及下调CyclinE的表达将GMSCs细胞周期阻滞在GO/G1期4.过表达miR-3940-5p体外促进GMSCs成骨/成牙向分化潜能