人乳头瘤病毒18E6在成釉细胞瘤中检测意义的初探

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目的成釉细胞瘤(ameloblastoma,AB)是最常见的牙源性肿瘤,呈局部浸润性破坏,属于良性肿瘤,容易复发,但是远端转移极为罕见。在组织学上,AB分为滤泡型、丛状型、颗粒细胞型,促结缔组织增生型等。AB的发病机理尚未明确。人乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)是一种DNA病毒,约8000bp,无包膜。HPV易感染粘膜和复层鳞状上皮,分为高危型和低危型。低危型包括HPV-6和HPV-11,主要导致良性病损的发生,包括大部分的病毒性性传播性疾病。高危型有HPV-16、HPV-18、HPV-31等,常导致恶性肿瘤的发生,包括宫颈癌和头颈部肿瘤。HPV致癌中心环节是HPV16和18的转化蛋白E6,E6能与宿主细胞p53肿瘤抑制蛋白结合,从而引起p53降解。因为p53具有调节细胞生长和肿瘤抑制功能,p53功能的丧失将会导致细胞周期紊乱,有利于突变、染色体不稳定及宿主基因组癌变的发生。本实验应用免疫组化、PCR、Western Blot等方法对人AB中HPV18E6的DNA和蛋白表达进行检测,探讨HPV18E6与人AB生物学行为的相关性和在该肿瘤的发生、发展中起到的作用。材料与方法1、免疫组化中国医科大学口腔医学院和第一临床医学院1987年至2005年存档蜡块,重新制作切片HE染色并复阅。正常口腔粘膜(Normal oral mucosa,NOM)5例,良性AB 45例,恶性AB5例。病理分型:滤泡型22例,丛状型13例,单囊型5例,颗粒细胞亚型1例,促结缔组织增生型2例,外周型2例。2、Western blot印记分析冰冻组织标本为2004—2006年冻存标本,NOM 2例,AB 18例。组织学分型:滤泡型2例,丛状型7例,棘皮瘤型2例,基底细胞型2例,促结缔组织增生型2例,单囊型3例。3、PCR冰冻组织标本为2004-2005年冻存标本,NOM11例,AB 12例。病理分型:滤泡型1例,丛状型5例,棘皮瘤型2例,基底细胞型1例,促结缔组织增生型1例,单囊型2例。结果1、免疫组化HPV18E6蛋白表达在良性AB的星网状层和外周层细胞胞浆和胞核中,表达阳性率为46.67%(21/45),其中核、浆阳性为3例,浆阳性18例,两例外周型AB表达阴性。HPV18E6蛋白在1例恶性AB中为核强阳性表达,阳性率为20%(1/5),正常粘膜表达阴性,与AB的表达具有显著性差异(X~2=4.023,P<0.05),良性AB与恶性AB之间差异无统计学意义。2、Western Blot在18例AB中HPV18E6全部为阳性表达,阳性率100%(18/18),2例正常粘膜与免疫组化检测结果一样均表达阴性。AB与正常粘膜中HPV18E6的表达差异显著(F=4.670,P<0.05)。3、PCR检测12例AB和11例正常粘膜,12例AB中HPV18E6DNA阳性率为58.33%(7/12),11例正常粘膜中HPV18E6DNA阳性率为18.18%(2/11)。AB与正常粘膜中HPV18E6的表达经统计学分析有明显差异(X~2=3.884,P<0.05)结论1、部分AB中HPV18E6 DNA水平和蛋白质水平都呈现阳性表达,且明显高于正常粘膜。2、HPV18E6可能参与AB的发生、发展,是导致AB肿瘤细胞的增殖失控状态的因素之一。
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