【摘 要】
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目的观察siRNA-NRP-2在胃癌细胞株N87中的表达,及对其增殖和凋亡的影响。方法以脂质体Lip-2000为载体,将带有荧光的siRNA转入规范培养的胃癌细胞株N87中,于转染48h后,通过荧光显微镜观察转染效率;本次实验分为三组:将转染PBS设为空白对照组,转染NControl-siRNA设为无意义序列组,转染siRNA-NRP-2设为实验组;通过RT-qPCR法检测NRP-2的mRNA在三
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目的观察siRNA-NRP-2在胃癌细胞株N87中的表达,及对其增殖和凋亡的影响。方法以脂质体Lip-2000为载体,将带有荧光的siRNA转入规范培养的胃癌细胞株N87中,于转染48h后,通过荧光显微镜观察转染效率;本次实验分为三组:将转染PBS设为空白对照组,转染NControl-siRNA设为无意义序列组,转染siRNA-NRP-2设为实验组;通过RT-qPCR法检测NRP-2的mRNA在三组细胞中的相对表达量;Western blot法检测三组细胞中NRP-2蛋白表达;免疫细胞化学染色检测三组细胞中Ki-67蛋白的表达情况;CCK法测定三组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测三组细胞的凋亡水平。以上实验重复3次。结果1转染效率检测结果:应用脂质体Lip-2000将转染荧光siRNA转染至N87细胞48h后,在荧光显微镜下观察转染效率达80%以上。2反转录实时荧光定量聚合酶链反应结果显示:转染组胃癌细胞N87中NRP-2的mRNA相对表达量较空白对照组及无意义序列组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。3 Western blot检测结果显示:转染组胃癌细胞N87中NRP-2的蛋白表达量较空白对照组及无意义序列组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。4免疫细胞化学染色结果表明:转染组胃癌细胞N87的Ki-67蛋白表达量较空白对照组及无意义序列组明显下降,经统计学分析后,差异具有统计学意义(P<0.05)。5 CCK实验测定结果表明:转染组细胞的增殖能力较空白对照组及无意义序列组明显降低,P<0.05,差异有统计学意义。6流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明:转染组细胞的凋亡水平较空白对照组及无意义序列组显著增加,其差异具有统计学意义(P<0.05)结论利用RNAi技术沉默胃癌细胞NRP-2表达后可显著降低胃癌细胞的增殖水平,增加胃癌细胞的凋亡水平。图9幅;表7个;参129篇。
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