SARS冠状病毒是一种拥有最大基因组的单股正链RNA冠状病毒,能够引起严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndromes)。SARS冠状病毒主蛋白酶(SARS-CoVMpro)在病毒复制和致病性方面起着关键的作用,且在同属的冠状病毒中具有高度的保守型,是抗SARS病毒药物的一个理想靶点。因此,其抑制剂或药物的发现与开发不仅具有重要的理论意义,同时也蕴含重大的实践价值。本研究首先对SARS冠状病毒主蛋白酶进行异源重组表达与提纯,然后以其为靶点,利用体外药物筛选模型,通过荧光强度的变化检测出酶的活性,对小分子片段库和蛋白酶抑制剂库共275种化合物进行了体外抑制活性的评价。通过筛选获得抑制率>80%、淬灭率<20%的化合物 5 种,为 P-1-08、P-1-19、P-2-24、P-2-28 和 P-2-54,其半数抑制浓度(IC50)分别为:0.69±0.05μmol/L、1.19±0.41μmol/L、0.14±0.01μmol/L、1.36±0.07μmol/L和0.36±0.03μmol/L。之后运用抑制动力学研究以及分子对接等方法探讨筛选出的这5种阳性结果对SARS-CoV Mpro的抑制机制。分子对接结果发现P-l-08、P-l-19、P-2-24 和 P-2-54 能与 SARS-CoV Mpro催化活性中心的 Cys-145 形成共价键,结合动力学曲线证明这四种化合物为不可逆抑制剂。P-2-28能够与SARS-CoV Mpro的Asn-142、Gly-143和Gln-189形成氢键,以非共价键的方式与蛋白结合,根据Lineweaver-Burk图和Dixon图的研究,发现该化合物对SARS冠状病毒主蛋白酶呈竞争性抑制,其抑制常数K,为0.81μmol/L。通过对底物浓度,IC50值及K,值关系的研究,进一步验证了化合物P-2-28的抑制作用为竞争性抑制。这5种抑制剂的发现为SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的研究打下基础,为抗SARS病毒药物开发提供了先导化合物。