【摘 要】
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第一部分 腹主动脉瘤模型的建立和IRF4表达及定位分析目的:建立小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型,明确小鼠腹主动脉瘤中IRF4的表达及细胞定位。方法:1.构建小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型并检测IRF4的表达情况应用野生型C57BL/6小鼠,构建小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型。4周后进行超声检查,并收取腹主动脉标本,应用RT-q PCR和WB检测腹主动脉血管壁IRF4的表达。2.明确小鼠
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第一部分 腹主动脉瘤模型的建立和IRF4表达及定位分析目的:建立小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型,明确小鼠腹主动脉瘤中IRF4的表达及细胞定位。方法:1.构建小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型并检测IRF4的表达情况应用野生型C57BL/6小鼠,构建小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型。4周后进行超声检查,并收取腹主动脉标本,应用RT-q PCR和WB检测腹主动脉血管壁IRF4的表达。2.明确小鼠腹主动脉瘤标本中IRF4的细胞定位应用双免疫荧光染色,明确IRF4在小鼠腹主动脉瘤中的细胞定位情况。结果:1.AngⅡ皮下输注可使小鼠腹主动脉直径增加,血管壁α-SMA表达下降,CD68、MMP2和MMP9表达增加,弹性纤维断裂、溶解,炎性细胞浸润。与对照组相比,AngⅡ组腹主动脉血管壁IRF4表达增加。2.小鼠腹主动脉瘤中IRF4主要表达于巨噬细胞。结论:小鼠AngⅡ皮下输注模型可以用于小鼠腹主动脉瘤的研究。腹主动脉瘤标本中IRF4表达升高,主要定位于巨噬细胞。IRF4可能参与腹主动脉瘤的发生发展。第二部分巨噬细胞IRF4缺失对腹主动脉瘤的影响目的:探讨小鼠巨噬细胞IRF4缺失在腹主动脉瘤中的作用。方法:1.IRF4fl/fl和IRF4cko小鼠的繁殖及鉴定利用RT-q PCR和Western blot检测IRF4fl/fl和IRF4cko小鼠腹腔巨噬细胞和血管平滑肌细胞中IRF4的表达。2.体内观察巨噬细胞IRF4缺失对腹主动脉瘤的影响利用IRF4fl/fl和IRF4cko小鼠构建小鼠AngⅡ皮下输注腹主动脉瘤模型,4周后行超声检查。对腹主动脉标本行HE、EVG染色和RT-q PCR检测,探究巨噬细胞IRF4缺失对腹主动脉扩张,动脉瘤形成,平滑肌细胞丢失,炎性细胞浸润,基质金属蛋白酶表达的影响。结果:1.与IRF4fl/fl小鼠相比,IRF4cko小鼠腹腔巨噬细胞基本不表达IRF4。而平滑肌细胞中IRF4表达类似。2.巨噬细胞IRF4缺失增加小鼠腹主动脉血管直径,动脉瘤形成,降低血管壁α-SMA表达,促进CD68、MMP2和MMP9表达,促进弹性纤维断裂、溶解和炎性细胞浸润。结论:巨噬细胞IRF4缺失加重AngⅡ诱导的小鼠腹主动脉瘤的发生和发展。IRF4可能为腹主动脉瘤治疗提供新的靶点。第三部分IRF4对巨噬细胞极化的影响目的:探究体内和体外实验中IRF4对巨噬细胞极化的影响方法:1.细胞水平探究IRF4对巨噬细胞极化的影响LPS或IL-4干预IRF4fl/fl和IRF4cko小鼠原代巨噬细胞及慢病毒感染的RAW264.7细胞,应用RT-q PCR检测巨噬细胞表型相关分子的表达。2.探究体内巨噬细胞IRF4缺失对巨噬细胞极化的影响利用RT-q PCR检测腹主动脉标本中巨噬细胞表型相关分子的变化。结果:1.IRF4可抑制LPS诱导的极化,促进IL-4诱导的极化。2.巨噬细胞IRF4缺失促进腹主动脉血管壁巨噬细胞M1表型相关分子的表达,抑制巨噬细胞M2表型相关分子的表达。结论:IRF4影响体内和体外巨噬细胞的极化。巨噬细胞IRF4缺失可能通过影响巨噬细胞极化,促进小鼠腹主动脉瘤的形成。
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